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第六章 质谱分析及联用技术 Mass spectrometry, MS，GC-MS and HPLC-MS 简述： 质谱分析法是通过对被测样品离子质荷比 m/z(mass-charge ratio)的测定来进行分析的方法。被分析的样品首先要离子化，然后利用不同离子在电场或磁场运动行为的不同；把离子按质荷比分开而得到质谱图，通过对质谱图分析，得到样品的定性、定量结果。 本次课应掌握的知识点: 1. 质谱法的分析过程是什么?质谱仪器有哪几种类型? 2．质谱仪是由哪几部分组成的，各部分的作用是什么? 3．质谱仪离子源有哪几种，叙述其工作原理和应用特点? 4. 质谱仪质量分析器有哪几种，叙述其工作原理和应用特点? §6-1 质谱的发展历史 早在19世纪末(1886年)德国科学家 E.Goldstein在低压放电试验中观察到正电荷粒子, 随后W.Wein发现正电荷粒子束在磁场中发生偏转, 这些观察结果为质谱的产生提供了准备。 被誉为现代质谱学之父的英国学 者J.J.Thomson(1906年诺贝尔物理学奖 获得者）在二十世纪初即开展了正电荷 离子束的物理学研究，从而发明了质谱 法。 在1988 年，出现了电喷雾电离质谱(electrospray ionization mass spectrometry，ESI-MS)和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 (matrix-asisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS), 傅里叶变换质谱法 (Fourier transform mass spectrometry,MALDI-FTMS)开创了有机质谱分析研究生物大分子的新领域。 有机质谱跨出近代结构化学和分析化学的领域而进入了生物质谱的范畴，也就是进入了生命科学的范畴。 生物质谱大致在下列领域展开工作: 蛋白质分子质量的测定，氨基酸序列分析，蛋白质的质量肽谱，天然和生物合成蛋白质突变体分析，酶的活力部位研究和蛋白质折叠和高级结构的研究，核酸片段分子质量测定，寡核苷酸序列分析，核酸修饰部位的鉴定以及多糖和寡糖结构分析等。 §6-2 质谱仪器原理 质谱分析的基本原理是使所研究的化合物形成离子，然后使形成的离子按质量，确切地讲按质荷比 m/z (mass-charge ratio)，进行分离。因此质谱仪器必须具备下述几个部分： 此外，尚有真空系统、计算机控制及数据处理系统等。 一. 真空系统 质谱仪的离子源、质量分析器及检测器必须处于高真空状态(离子源的真空度应达10-3～10-5Pa，质量分析器应达10-6Pa)，若真空度低则: (1) 大量氧会烧坏离子源的灯丝;(2) 会使本底增高，干扰质谱图;(3) 引起额外的离子-分子反应，改变裂 解模型，使质谱解释复杂化; 二.进样系统1.储罐进样 图1-3是一种进样系统的示意图。对于气体及沸点不高、易于挥发的液体，可以用图中上方的进样装置。贮样器为玻璃或上釉不锈钢制成，抽低真空(1Pa)，并加热至 150℃，试样以微量注射器注入，在贮样器内立即气化为蒸气分子，然后由于压力梯度，通过漏孔以分子流形式渗透入高真空的离子源中。 2. 探头进样 对于高沸点的液体、固体,可以用探针(probe)杆直接进样(图1-3下方).调节加热温度，使试样气化为蒸气。此方法可将微克量级甚至更少试样送入电离室。探针杆中试样的温度可冷却至约 -100℃，或在数秒钟内加热到较高温度(如 300℃ 左右)。 3. 色谱进样 复杂混合物的直接质谱数据是没有意义的。借助色谱的有效分离，质谱可以在一定程度上鉴定出混合物的成分。 三. 离子源(ion source)  1. 电子轰击离子源 (Electron Impact, EI) 被分析的气体或蒸