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微生物的实验室培养 学习目标 说出培养基的类型、用途和基本成分。 举例说明常用的消毒与灭菌方法。 阐明培养基配制的方法和接种的方法。 学习重点 培养基的营养成分、无菌操作的基本方法、配制培养基的基本步骤、常用的微生物的接种方法。 学习难点 配制培养基的基本步骤、常用的微生物的接种方法。 课前预习 使用说明与学法指导 生物选修一专题二课题一 知识准备 教材助读 (一)、培养基 1.概念:人们按照微生物对 的不同需求,配制出供其 的营养物质。 2.分类方式 分类标准 类型 备注 培养基 的 培养基、 培养基和半固体培养基 培养基中加入凝固剂(有琼脂、明胶、硅胶等)即为 培养基。 培养基是实验室中最常用的培养基之一。 微生物的种类 细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养 培养基的特殊用途 基础培养基、加富培养基、选择培养基和鉴别培养基 选择培养基:允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 鉴别培养基:是在培养基中加入某种试剂或化学药品,使培养后会发生某种变化,从而区别不同类型的微生物。如鉴别大肠杆菌的伊红美蓝培养基,鉴别纤维素分解菌的刚果红培养基。 3.培养基的化学成分包括 四类营养成分。除此之外,培养基还要满足微生物生长对 、特殊营养物质以及 的要求。 (二)、无菌技术 1.关键 防止 的入侵。 2. 无菌技术包括: (1)对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 ; (2)将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 ; (3)为避免周围微生物污染,实验操作应在 旁进行; (4)避免已灭菌处理的材料用具与 相接触。 3.比较消毒和灭菌 消毒 灭菌 概念 用较 的物理或化学方法杀死物体 的部分微生物(不包括芽孢和孢子) 用较 的理化因素杀死物体 微生物(包括芽孢和孢子) 常用方法 消毒法( 消毒法) 消毒法、紫外线消毒法 灼烧灭菌、 灭菌、 灭菌 适用对象 操作空间、液体、双手等 接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等 (三)、 实验操作(大肠杆菌的纯化培养) 1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ①.计算:根据 比例,计算100mL培养基各成分用量。 ②.称量:牛肉膏较黏稠,可用玻棒挑取,同 一同称量。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速,目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。 ③.溶化:加水加热熔化牛肉膏与称量纸→取出称量纸→加入蛋白胨和氯化钠继续加热→加入 →用蒸馏水定容到100mL(整个过程不断用玻棒搅拌,目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂)。 ④.灭菌:将配制好的培养基转移到锥形瓶中,加塞包扎后用 灭菌锅灭菌;所用培养皿用报纸包扎后用 箱灭菌。 ⑤.倒平板:待培养基冷却至 左右时在 附近操作进行。 其过程是: 预习自测题 1. 下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是 A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前 2. 将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱的目的是 A.对比观察培养基有没有被微生物利用 B.对比分析培养基是否被杂菌污染 C.没必要放人未接种的培养基 D.为了下次接种时再使 3.关微生物营养物质的叙述中,正确的是 A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量 4. 下列物质中,不能用作酵母菌碳源的是 A.含碳有机物 B.蛋白胨 C.含碳无机物 D.花生粉饼等天然物 我的疑问 学始于疑1.倒平板的过程中,平板冷凝后为什么要将平板倒置? 2.平板划线过程中,为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗?为什么? 3.判断实验操作过程中是否成功的标准? 课内探究 质疑探究 实验操作(大肠杆菌的纯化培养) 归纳总结 消毒与灭菌的比较 比较项目 理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭 消毒 较为温和 部分生活状态的微生物 不能 灭菌 强烈 全部微生物 能 灭菌方法: ①接种环、接

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