微生物限度检查法要点分析.ppt

以小组为单位,对样品进行细菌总数及霉菌总数的检测,最后出具一份检测报告. 时间安排: 每班分两大组，每组分4小组。 小组长带领组员们查阅资料，实训前进行准备工作讨论、汇报，每小组讲解如何进行实训。 综合实训完成后，每位同学写一份心得体会 综合实训：咳嗽糖浆中细菌总数、 霉菌及酵母菌总数的测定 时间 12药1 12药2 14周周一1-2节 上课 14周周二3-4节，5-6节 上课 上课，小组讨论 14周周三1-2节 上课，小组讨论 14周周五1-2节，5-6节 实训（染色、镜检） 实训（染色、镜检） 时间 12药1 12药2 15周周一1-2节，周二5-6节 第一组综合实训 第二组复习 15周周二3-4节，周三1-2节 第一组综合实训 第二组复习 16周周一1-2节，周二5-6节 第二组综合实训 第一组复习 16周周二3-4节，周三1-2节 第二组综合实训 第一组复习 时间 12药1 12药2 17周周一1-2节 操作练习 17周周二3-4节 操作练习 17周周二5-6节，周五5-6节 考核（地点：微生物检验室） 17周周三1-2节，周五1-2节 考核（地点：微生物检验室） * 倾注 涂布 细菌总数测定的方法 取一定量的供试品以无菌生理盐水按比例进行系列稀释（10倍稀释），加入定量的稀释液于无菌平皿中，再加入已熔化的、温度在45℃左右的琼脂培养基，混匀，凝固后于培养箱培养，然后计数平板内菌落数。选取菌落数在30-300之间的平板进行计数，再乘以稀释倍数即可得每克或每毫升供试药品中的活菌总数。 取均匀供试液,进一步稀释成1:10 、1:100等适宜的稀释度。分别取连续2~3个稀释级10倍稀释的供试液各1ml,置直径约90mm的平皿中，再注入约45℃的培养基约15-20ml，混匀，待凝固后，倒置培养，每稀释度应作2～3个平皿。 1、供试品的制备(p184) 液体供试品：10倍稀释，采用三个 稀释度 用1ml无菌吸管精确吸取1ml样品悬液放入10-1的试管中，换另一支吸管将管内悬液来回吸吹三次，吸时伸入管底，吹时离开水面，使其混合均匀，然后自10-1试管吸1ml放入10-2试管中，换另一支吸管吸吹三次，……其余依次类推。 （可参考P163-P165） 每个稀释度用2-3个平皿，每个平皿加入1ml稀释液 2、 加入15ml已熔化的琼脂培养基 摇匀、待冷凝倒置培养 30－35℃ 48h 点数平板上菌落，得出平均菌落 菌数测定空白对照试验 取供试验用的稀释剂各1ml，置2-3个无菌平皿中，分别注入细菌、霉菌计数用的琼脂培养基制备成平板，经培养、检查，不得长菌。 注意同时要做空白对照！ 3、菌数报告方式 稀释度的选择（P163） 报告的方式：cfu/ml或cfu/g cfu (Colony-Forming Units)菌落形成单位 药典：细菌霉菌（酵母菌）计数： 以固体供试液为例，供试液以10倍递增稀释，将匀浆杯中内容物摇匀，取2-3支灭菌中试管，分别加入9ml灭菌稀释剂。另取一支1ml灭菌吸管，吸取供试液1ml，加入第一支试管中，混匀，制成1：100的供试液，以此类推，作10倍递增稀释。根据供试品污染的程度可稀释至10-3或10-4，一般取连续三级稀释液检验。 取吸管分别吸取1ml 10-1供试液加入4平皿中。再取另一支吸管分别取第二级稀释液1ml加入4个平皿中，第三级稀释液同样操作。将45℃左右的营养琼脂培养基按每一级稀释液倒入2个平皿，每个平皿15-20ml，立即摇匀。再取玫瑰红钠琼脂培养基按每一级稀释液倒入2个平皿，同样操作。 细菌数和霉菌数的阴性对照试验：分别吸取稀释剂各1ml加入到4个平皿中，再分别加入营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基各制成2个平板。 检查细菌的平板倒置于30-35℃培养箱中，培养2天。检查霉菌的平板倒置于25-28℃培养箱中，培养3天。逐日观察并记录结果。阴性对照的平板培养后均不得长菌。 　细菌宜选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌数计算的依据。 （1）如有1个稀释级在30～300(30～100)之间时,将该稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告； 菌数报告规则 （2）如同时有2个稀释级在30～300(30～100)之间时，按下式计算两级比值。 高稀释级的平均菌落数×稀释倍数 比值＝───────────────────────────── 　　　低稀释级的平均菌落数×稀释倍数 当比值≤2时，以两稀释级的均值报告，如比值为2~5时，说明两级之间存在较大差别，应以低稀