杨荣武生物化学第四章蛋白质的性质分类及研究方法分析报告.ppt

提纲 一、蛋白质的理化性质 二、蛋白质的研究方法 三、蛋白质的分类 * 第四章 蛋白质的性质分类及研究方法 紫外吸收：最大吸收峰为280nm 两性解离：蛋白质的pI值不能直接计算，只能使用等电聚焦等方法进行测定 胶体性质 沉淀反应：盐析、pI 沉淀、有机溶剂引起的沉淀和重金属盐作用造成的沉淀 变性、复性 水解 颜色反应 蛋白质的理化性质 蛋白质受到某些理化因素的作用，其高级结构受到破坏、生物活性随之丧失的现象。 导致蛋白质变性的物理因素有：加热、冷却、机械作用、流体压力和辐射；化学因素有强酸、强碱、高浓度盐、尿素、重金属盐、疏水分子和有机溶剂。 蛋白质变性以后，其理化性质发生一系列的变化。这些变化可以作为检测蛋白质变性的指标。主要变化包括：（1）溶解度降低。（2）黏度增加。（3）生物活性丧失。（4）更容易被水解。（5）结晶行为发生变化。 蛋白质变性 蛋白质在强酸、强碱或蛋白酶的催化下均能够发生水解。但需要注意的是，酸水解会破坏几种氨基酸，特别是Trp几乎全部被破坏，其次是三种羟基氨基酸。另外Gln和Asn在酸性条件下，容易水解成Glu和Asp；碱水解会导致多数氨基酸遭到不同程度的破坏，并且产生消旋现象，但不会破坏Trp；酶水解效率高、不产生消旋作用，也不破坏氨基酸，但不同的蛋白酶对肽键特异性不一样。 蛋白质的水解 四种羧肽酶来源和特异性 几种蛋白酶特异性的比较 蛋白质的各种颜色反应 假定你发现一种新的蛋白质：蛋白质X 1. 如何得到这种蛋白质? 蛋白质的分离、纯化技术 2. 这种蛋白质的大小？ （SDS） 3.它的pI是多少？ （等电聚焦） 4. 其他细胞或其他生物体内是否存在？ （Western印迹） 5. 其一级结构如何？ （序列分析） 6.其三维结构又如何？ X-射线衍射和核磁共振 蛋白质研究方法 准备工作要解决三个问题： 纯化蛋白质的目的； 目标蛋白的测活方法； 纯化蛋白质的原料。 纯化步骤： 破碎细胞或组织（混合和匀浆）； 去除残渣（离心）； 沉淀/浓缩（硫酸铵或聚乙二醇）； 纯化（层析）； 鉴定。 蛋白质纯化 蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 等电聚焦电泳 蛋白质的双向电泳 Western印迹 直接测定法 化学测定法 质谱 间接测定法。 先得到某一种蛋白质基因的核苷酸序列，然后根据通用的遗传密码表间接推导出由其决定的氨基酸序列。 蛋白质一级结构的测定 蛋白质一级结构直接测定法的主要步骤 多肽序列分析实例 Biosci41S: Biochemistry class 3