样品离子化研究解析.pptVIP

样品离子化研究 主讲人：付建武 江西中医学院研究生部 质谱(MS)法常用的离子化方式：基本原理是将供试物分子经一定离子化方式，如电子轰击或其它离子化方式，一般是把分子中的电子打掉一成为M+，继之裂解成一系列碎片离子，再通过磁场使不同质荷比(m/z)的正离子分离并记录其相对强度，绘出MS图。即可进行元素分析、分子量测定、分子式确定和分子结构的解析和推断等等。离子源的作用是接受样品产生离子，常用的离子化方式有：电子轰击离子化（electron impact ionization，EI）、化学离子化(Chemical Ionization,CI)、场致离子化(Field Ionization,FI)、场解吸离子化(Field Desorption Ionization,FD)、负离子化学离子化(Negative Ion CI,NICI)、快原子轰击(Fast Atomic Bombardment,FAB)、激光解吸(Laser Desorption Inoization,LD)等等。 质谱有多种电离方法，每一种电离方法都有一定的分子量检测范围，一般认为热喷雾的分子量检测最大范围约8ku，快原子轰击为25ku。但是随着分子质量的增加，所有分析方法的灵敏度均有所下降。 离子源 电子轰击离子化可使分子引起相当大的碎裂，所得分子离子峰往往并不很强甚至不能识别。分子较大碎裂对供试药物的鉴定和结构解析是十分有利的；但对混合组分的分析和药物纯度检查是不利的。 电子轰击离子源装置原理 在此装置中，由阴极发射出的电子经加速后在飞向阳极过程中，与由进样器输入的样品分子碰撞而引起电离。所产生的离子由静电透镜引出电离室，经加速、聚焦成一定能量和强度的离子束，通过出口狭缝进入质量分析器。电离室通常保持一定的真空度和温度。阴极发射的电子数通过调节阴极灯丝温度加以控制，而电子的能量则通过控制两极上的外加电压来调整。静电场通常保持在6-100V范围内。其特点是能得到较强而稳定的离子流，但要求样品只能是气态的原子或分子。 EI 源的特点： 电子轰击电离的灵敏度和分辨率 一定能量的电子直接作用于样品分子，使其电离，且效率高，有助于质谱仪获得高灵敏度和高分辨率。 有机化合物电离能为10eV左右，50-100eV时，大多数分子电离界面最大。70eV能量时，得到丰富的指纹图谱，灵敏度接近最大。适当降低电离能，可得到较强的分子离子信号，某些情况有助于定性。 化学电离源的特点 准分子离子峰强； 不会发生象EI中那么强的能量交换，较少发生化学键断裂，谱形简单。 ； 不适用难挥发试样； 不会发生象EI中那么强的能量交换，较少发生化学键断裂，谱形简单。 分子离子峰弱，但（M+1） 峰强，这提供了分子量信息。 电子轰击的缺陷是分子离子信号变得很弱，甚至检测不到。化学电离引入大量气体试剂，使样品分子与电离离子不直接作用，利用活性反应离子实现电离，其反应热效应可能较低，使分子离子的碎裂少于电子轰击电离。商用质谱仪一般采用组合EI/CI离子源。试剂气一般采用甲烷气，也有N2,CO,Ar或混合气等。试剂气的分压不同会使反应离子的强度发生变化，所以一般源压为0.5-1.0Torr。 场致离子化的特点 非常适用于易变分子的离子化，如碳水化合物、氨基酸、多肽、抗生素和苯丙胺类药物均宜采用； 此法也能产生较强的分子离子峰和准分子离子峰。 分子离子峰强； 碎片离子峰少； 不适合化合物结构鉴定； 场解吸离子化(Field Desorption Ionization,FD) 当样品蒸汽邻近或接触带高的正电位的金属针时，由于高曲率半径的针端处产生很强的电位梯度，样品分子可被电离，这称为场电离。场电离要求样品分子处于气态，灵敏度又低，因而应用逐渐减少。 场解吸的原理与场电离相同，但样品是被沉积在电极上。为增加离子的产率，电极上有很多微针（microneedles）。在电场的作用下（或再辅以温和地加热），样品分子不经汽化而直接得到准分子离子，因而场解吸适合于难汽化的、热不稳定的样品，如肽类化合物、糖、高聚物、有机酸的盐、有机金属化合物等。 由场解吸所得的质谱中准分子离子峰强，碎片离子很少，为得到较多的结构信息需进行碰撞导断裂（collision induced dissociation,CID）。 场解吸离子化扩大了MS的使用范围，此法可用于极性大、难气化以及对热不稳定的化合物，因而在生物活性组分、药物及其代谢产物或分解产物的研究分析工作中是一种非常重要而且十分有效的分析工具。 负离子化学离子化(Negative Ion CI,NICI) 负离子化学离子化(Negative Ion CI,NICI)：是在正离子MS的基础上发展起来的一