实验四过碘酸雪夫反应教案解析.ppt

细胞化学染色是细胞学和化学相结合的一门科学。它是以细胞形态学为基础，根据化学反应的原理、应用涂片染色的方法观察细胞的化学成分及其变化的重要方法。 细胞化学染色研究的对象：细胞和组织中的化学物质 细胞化学染色的要求： 1. 保持细胞的生前结构。 2. 保存细胞生前的化学成分和酶的活性。 3. 所用方法是已知的化学反应或物理变化。 4. 反应产物必须是一种有色物质，可以进行显微镜观察。 5. 反应产物不能移位，必须有一定的稳定性。 细胞化学染色的步骤： 1. 固定：将细胞的生前结构和化学物质保存下来。 2. 显示：通过一系列化学反应形成稳定的有色沉淀。 3. 复染：使各种细胞都显示出来以便于观察。 细胞化学染色的实用价值 一、协助白血病的诊断 1.急性白血病细胞类型的鉴别。 检查顺序：POX PAS NAE+NaF NCE 2.协助慢性白血病的诊断。NAP PAS 二、协助贫血的诊断 1.缺铁性贫血：铁染色 2.再障：NAP 3.铁粒幼细胞性贫血：铁染色 三、鉴别某些容易混淆的细胞以协助诊断 四、协助鉴别良性与恶性的淋巴细胞疾病 五、协助两种感染的鉴别 实验四 过碘酸-雪夫反应 (糖原染色) [目的要求] 1．掌握本实验的原理和临床意义。 2．熟悉本实验的操作方法及注意事项。 [实验原理] 糖原中的1，2-乙二醇基经高碘酸氧化后产生醛基，此醛基进而与雪夫 (Schiff) 液作用，使无色品红变为红色的化合物，定位于胞浆中。 [实验器材和试剂] 1．10g／L高碘酸液 2．雪夫 (Schiff) 染液 3．亚硫酸液 4．20g／L甲绿 5．染色架、洗耳球、接水盘及吸水纸。 6．光学显微镜、香柏油、乙醚和擦镜纸。 [实验步骤] 1．新鲜血片或骨髓片用95％乙醇固定10min，蒸馏水冲洗，待干。 2．10g／L高碘酸氧化15～20min，蒸馏水冲洗，待干。 3．置雪夫试液室温染色30～60min。 4．用亚硫酸溶液冲洗3次后，以自来水冲洗2～3min，待干。 5．20g／L甲绿复染10～20min。 6．水洗，待干，镜检。 7．结果 (1) 阳性反应：在细胞浆内染红色，呈弥漫状、颗粒或块状。胞核染成绿色。阴性反应，胞浆无色。 (2) 反应强度判断标准： ① 中性粒细胞的分级标准： (－) 胞浆无红色颗粒。 (+) 胞浆内呈淡红色有极少颗粒。 (++) 胞浆呈红色，厚而不透明，或有较少颗粒。 (+++) 胞浆呈深红色，颗粒紧密，但尚有空隙。 (++++) 胞浆呈深紫红色，颗粒紧密，无空隙。? ② 淋巴细胞分级标准： (－) 胞浆内无颗粒。 (+) 胞浆内呈弥散淡红或有少数细颗粒 ( 9个)。 (++) 胞浆内呈弥散较深的红色或有多数细颗粒 (10个)。 (+++) 胞浆内有较粗颗粒或少数小块状。 (++++) 胞浆内呈多数粗颗粒并有大块红色物质。 ? ③ 幼红细胞的分级标准： (－) 胞浆内无颗粒。 (+) 胞浆内有少数分散细小颗粒或浅红色弥漫物质。 (++) 胞浆内有1～10个中等颗粒或弥漫的红色。 (+++) 胞浆内有11～20个较粗颗粒或呈深红色。 (++++) 胞浆颗粒较多，20个以上，并且粗，致密且呈紫红色。 ④ 巨核细胞的分级标准： (－) 细胞内没有糖原，但细胞浆内有弥散性着色，此系其它多糖类物质。 (+) 含少量糖原，即含数小块或一大块糖原，糖原常定位于近核膜处。 (++) 胞浆内含有中等糖原，即含许多小块或少数大块糖原，约占胞质的1/3。 (+++) 胞浆内含有大量糖原，呈大块状，其总面积约占胞浆面积的1/2以上。 （＋＋＋＋）胞浆内充满糖原。 (3) 阳性率和阳性积分：根据不同情况的需要，观察同一类细胞100个，求出阳性率的百分比，将百分率与分级数的积相加，其总和即为积分。 实验五 过氧化物酶 (POX) 染色 [目的要求] 1．? 掌握本实验的原理和临床意义。 2．? 熟悉本实验的操作方法及注意事项。 [实验原理] 细胞内的过氧化物酶能将底物的过氧化氢分解，产生新生态氧。后者将试剂中的联苯胺氧化为联苯胺蓝，它是一种不稳定的中间产物，再与亚硝基铁氰化钠结合进而生成蓝黑色化合物沉淀于酶的所在部位。 [实验器材和试剂] 1. 0.3％ 联苯胺乙醇溶液 联苯胺