基因工程--选修三要点分析.pptVIP

练习 1、在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶 2.下列关于限制酶的说法正确的是(双选） A.限制酶广泛存在于动植物体中，微生物中很少分布B.一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列C.不同的限制酶切割DNA的切点不同D.限制酶的作用只是用来提取目的基因 (一)从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 * 大纲要求： 1、了解基因工程的诞生 2、理解基因工程的原理及技术、PCR技术 3、理解基因工程的应用 4、了解蛋白质工程 一、基因工程的概念：是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 理解概念把握以下几点： 1、基因工程属于可遗传变异中的基因重组； 2、通过基因工程所产生的变异是定向的； 3、基因工程的物质基础和结构基础是：都是由脱氧核苷酸组成；都具有双螺旋结构 4、目的基因一般要在体外进行重组——接到运载体上。 5、为什么目的基因在不同生物中也能表达成功？ 共用一套遗传密码 二、基本工具 1、限制性核酸内切酶（分子手术刀） （1）来源 主要从原核生物分离纯化，如；还可以来源于真核生物，如酵母菌等。 （2）特点 只对异源DNA起作用——保护细胞原有的遗传信息 （3）作用 识别特定的核苷酸序列，并使磷酸二酯键断开 （4）结果：产生黏性末端或平末端 要点分析：用同一种限制酶剪切的黏性末端是互补配对的；在基因工程中使用的要是同一种限制酶。 2、DNA连接酶（分子缝合针） （1）E.coli DNA连接酶 来源：大肠杆菌 作用：将黏性末端的磷酸二酯键连接起来； （2）T4DNA连接酶 作用：可将两种黏性末端缝合，但平末端效率低 来源：T4噬菌体 比较联系：DNA酶、限制酶、DNA聚合酶、DNA连接酶的作用、区别 3、基因进入受体细胞的载体（分子运输车） （1）常用载体：质粒、动植物病毒等 质粒的化学本质：小型状DNA分子 具备的条件： 对受体细胞无害，不影响受体细胞正常生命活动 具有标记基因：可以鉴定目的基因是否进入受体细胞内； 能自我复制：保持连续性； 有一个或多个限制酶切点：目的基因的插入点。 A BC 3．番茄在运输和贮藏过程中，由于过早成熟而易腐烂。应用基因工程技术，导入某种生物的一个基因，可以合成某种物质，抑制促果实成熟激素的合成，可使番茄贮藏时间延长，培育成耐贮藏的番茄新品种，这种转基因番茄已于1993年在美国上市。请回答 （1）在培育转基因番茄的基因操作中，所用的基因的“分子手术刀”是 ，基因的“缝合针”是? ???????? ，基因的“运输工具”是????????? 。 （2）某种生物基因能成功和质粒DNA嫁接在一起的原因是：??? ??? 能在番茄内表达的原因是： ? ? 组成DNA的脱氧核苷酸相同，而且DNA都是双螺旋结构? 限制酶 DNA连接酶 运载体 共用一套密码子? 二、基因工程的步骤 1、目的基因的获取 方法 从基因文库中获取目的基因 利用PCR技术扩增目的基因 用化学方法直接人工合成(逆转录) 2、基因表达载体的构建（核心） 组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因 复制起点，能复制并带着插入的目的基因一起复制 标记基因，可用来筛选成功表达的个体。 注意：1、质粒与重组质粒的区别 目的基因，可表达合成特殊功能的物质。 启动目的基因的转录 终止目的基因的转录 2、启动子与起始密码子、终止子与终止密码的区别 位置不同：起始密码和终止密码在mRNA上；启动子和终止子在DNA上； （本质不一样） 功能不同：启动子与终止子分别启动基因的转录和终止基因的转录；起始密码子与终止密码子分别启动翻译和终止翻译的过程。 想一想：试描述其构建过程？ 3、将目的基因导入受体细胞 （1）将目的基因导入植物细胞 （2）将目的基因导入动物细胞 方法：农杆菌转化法——使目的基因整合到受体细胞染色体上的DNA上；基因枪法、花粉通道法 受体细胞：一般是受精卵细胞 也可以是体细胞 方法：显微注射法； 受体