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答辩人：XXX 专 业：生物技术 果胶酶的基因克隆及表达 果胶及果胶酶概述 果胶酶的应用 研 究 内 容及意义 研究材料与方法 1 2 3 4 国内外研究动态 资料来源 5 6 果胶酶的基因克隆及表达 根据酶作用的酸碱条件可将果胶酶分为三类:酸性、中性和碱性果胶酶。根据酶作用类型可以将果胶酶大致分三类:果胶酷酶（pectin esterases,PE)、果胶解聚 酶(depolmerizing enzyme)和原果胶酶(Protopectinase)。 .果胶酶的分类 1 .果胶酶的分类 1 果胶解聚酶 果胶裂解酶 原胶酯酶 是降解果胶糖苷键。其中果胶水解酶(又称聚半乳糖醛酸酶)是在有水参加反应的情况下促进聚半乳糖醛酸链水解的一种果胶酶,其应用最为广泛。 属于裂解酶类,又称碱性果胶酶。该酶是通过反式消 去作用(β-消除反应)使糖苷键断裂,并使邻近糖苷键的羧基或酯化的羧基一边发生反式消去作用。 是一种羧酸酯酶,属于水解酶类它的作用是催化果胶分子水解生成多聚半乳糖醛酸和甲醇 建筑业应用软件 .果胶酶的应用 2 在食品行业的应用 在食品工业中，人们利用酸性果胶酶来澄清果汁，它能使果汁过滤的时间缩短很多。据文献报道，在生产中添加酸性果胶酶可以使葡萄、香蕉和苹果的出汁量提高，此外，果胶酶的添加浓度对果汁的澄清效果也有一定的影响。在茶叶和咖啡的生产过程中也有果胶酶的应用，添加果胶酶可以减轻茶叶发酵过程中的产气泡现象，减少咖啡豆中的外层粘液对发酵过程的干扰。 建筑业应用软件 .果胶酶的应用 2 果胶酶在纺织业中的应用 在纺织业中，为了提高棉产品的柔软度，人们使用螯合剂和碱性溶液以及表面活性剂等物质来分解棉中杂质。截止现在，世界上很多实验室已从自然界中获得很多碱性果胶酶，碱性果胶酶可以降解棉麻类物质上的果胶类物质，可以用于棉麻纤维的精炼，从而使非纤维素类的杂质释放出来。这样不仅可以提高棉麻类产品的润湿性和柔软度，而且采用碱性果胶酶对棉纤维进行精练对环境更为友好，不会产生碱性废水污染，其作业环境较安全，能耗低廉，因此其应用前景十分广阔，目前碱性果胶酶在纺织业中的影响越来越大 建筑业应用软件 .果胶酶的应用 2 果胶酶在造纸中的应用 造纸业也是当今世界上对环境负担较重的行业之一，其产生的碱性废水会导致河流环境的污染。随着科技发展和环保意识的增强，酶制剂在造纸行业的应用越来越受到重视。目前，世界上许多国家已明令条文将碱性果胶酶用于造纸业中，以便减轻造纸业对河流环境的污染。比如，在制浆过程中，溶解性阴离子多糖(果胶或聚半乳糖醛酸)会从原料中释放出来，这多含果胶多的杂质会大幅提高废液粘度，这就会严重影响纸浆过滤效率。传统做法是添加大量的阳离子聚合物来减轻浓度，达到排放标准。但是碱性果胶酶的存在可以将果胶或聚半乳糖醛酸等导致粘度的物质降解，从而减少或者避免阳离子聚合物的添加，从而提高纸浆的质量、减轻环境污染 建筑业应用软件 .果胶酶的应用 2 果胶酶在饲料中的应用 饲料中存在相当多的非淀粉多糖(Non-starch Polysaccharides,NSPs)，是由纤维素、半纤维素、果胶和抗性淀粉四部分组成的植物组织中除淀粉以外所有碳水化合物的总称。NSPs 不仅对单胃动物没有营养价值，而且还成为肠道内的抗营养因子，其在动物肠道内能够结合大量的水，增大了食糜粘度，影响了消化酶活性，刺激消化管代偿性增大，导致肠道有害菌过度繁殖，降低了肠道对养分的吸收速度。目前，果胶酶可以和纤维素酶等组成复合酶制剂，其在饲料应用中可能会取得更好的效果。此外，果胶酶的单位酶活相对较高，催化效率较高，因此有很好的应用前景 1、 课题研究实用价值 理论构建： 2、 研究的意义 该研究为碱性果胶酶的工业化生产和处理纺织工业传统碱性前处理带来的高污染问题提供技术支持具有重要意义 3 .研究内容及意义 本研究从高温堆肥中筛选出一株高温条件下产碱性果胶酶菌株DG一3,并对该菌株进行生理生化鉴定和系统发育分析;对其所产的碱性果胶裂解酶进行初步的研究;从菌株DG一3总DNA中成功扩增出碱性果胶裂解酶基因pe1A,并将其在五,口11BL21中实现表达 .研究材料与方法 4 菌株DG-3,本实验分离获得。E.coli.DH5a、E.coli.BL21菌株以及质粒。 材料 方法 地衣芽孢杆菌染色体总DNA提取 1 质粒的制备 2 碱性果胶基因片段的克隆 3 表达载体的构建 4 建筑业应用软件 1.地衣芽孢杆菌染色体总DNA提取 DG-3菌株划平板活化,挑单菌落接种于5ml培养基中,50℃剧烈