分子生物学课件-3.pptVIP

DNA重组 —DNA分子内或分子间发生遗传信息的重新组合。 （1）同源重组 （2）位点特异性重组 （3）转座重组 （4）异常重组 二 同源重组的分子模型 1.Holliday于1964年提出Holliday模型 （1）两个同源染色体DNA排列整齐 （2）两DNA分子同一部位两单链发生断裂引发重组 （3）断裂的单链游离末端彼此交换形成Holliday中间体 （4）通过分支迁移产生异源双链DNA分子。 （5）中间体在内切酶和连接酶作用下，形成拼接重组体和片段重组体。 RecA引起的链交换和Holliday结构的生成 第二节 位点专一性重组 细菌的特异位点重组——鼠伤寒沙门氏杆菌鞭毛蛋白H1和H2转换 20世纪60年代末期,在不同实验室发现一系列可转移的抗药性转座子 1983年Barbara McClintock被授予诺贝尔生理学与医学奖。 逆转录转座子 将DNA—DNA的转移过程称转座。 DNA—RNA—DNA的转移过程——逆转录转座。 逆转录子——一类移动因子在转座过程中需要以RNA为中间体，经过逆转录过程再分散到基因组中。 在所有高等生物的基因组构成中，存在着与逆转录病毒基因组非常相似的逆转录转座子。 逆转录转座子与简单转座子比较 1.与高频率自发突变有关； 2.刺激寄主细胞基因组发生多种形式的遗传重排； 3.插入单元两端的DNA序列在插入过程中增加3-13bp； 4.转座单元的末端含有长度为2-50bp的反向重复 5.转座过程经常与转座单元的复制同时进行； 6.转座子通过编码蛋白质作用于转座单元来对自身的转座功能进行调控。 逆转录子的结构特点 逆转录子编码逆转录作用的关键酶:逆转录酶和整合酶。 按结构特征分两类（1）与逆转录病毒类似的LTR、gag和pol基因，但无env基因。（2）不具有LTR，但有3‘polyA、 gag和pol基因。 逆转录子的生物学意义 对基因表达的影响 逆转录介导基因的重排 逆转录子在生物进化中的作用 四、转座子转座频率的调控 ? 每个转座子控制自身转座的核心----控制转座酶的水平 1、Tn10转座机制 ? Tn10为复合型转座子 ? IS10R元件提供转座酶活性-----合成转座酶的序列 ? 自发转座频率---10－7 ? Tn10转座酶水平是控制转座的关键 ? 有两种控制转座的方式 a） 通过反义RNA的翻译水平控制 ? IS10R外侧边缘两个启动子 ? PIN控制IS10R的转录 弱启动子 ? POUT—强启动子 右向转录宿主DNA ? INRNA和OUTRNA 有36bp的重叠 稳定性： OUTRNA??INRNA ? 大量OUTRNA作为 INRNA的反义RNA b） 甲基化作用控制转座酶合成及其与DNA的结合 ? Tn10转座酶启动子含有GATC序列（其它转座子） ? E.coli中Dam甲基化酶 作用使启动子相对钝化 只能利用刚刚复制完成 时出现少数转座酶 ? 此外，IS10R的末端 IR也含有GATC， 甲基化的GATC不能 结合转座酶 ? Tn10在DNA刚刚 复制后发生转座 五、转座子的某些遗传学效应 1.转座频率10-8——10-3，引起插入突变； 2.插入位置染色体重排而出现新基因； 3.影响插入位置邻近基因的表达,使宿主表现型改变； 4.引起染色体插入位点两侧染色体畸变。 真核生物的转座成分根据转座机制目前分为两类： a) 转座机制与细菌的转座子类似 遗传信息： DNA→DNA ? 玉米的Ac-Ds元件、果蝇的P元件和FB元件等 b) 转作机制类似逆转录病毒 遗传信息： DNA→RNA→DNA ? 如：逆转录病毒、果蝇的copia元件、酵母的Ty元件 真核生物的转座 酵母 果蝇 哺乳 果蝇 ? Int蛋白能切断DNA，并使它重新连接，近而使holliday结构拆分 ? 重组时attP和attB部位交叉断裂，互补单链末端进行交叉杂交 5、整合与切除的控制 （1） 整合 ? CⅡ---促使阻遏蛋白CⅠ的产生 ---与int gene 的PI结合，转录产生Int蛋白 ---且PI位于xis基因内，CⅡ与PI结合导致xis gene失活 （2） 切除 ? 寄主SOS反应时---RecA大量产生，促使阻遏蛋白CⅠ的水解 ---把OL和OR从阻遏状态释放出来