生物芯片技术及其进展资料.pptVIP

组织芯片 组织芯片 点样仪 石蜡包埋机 组织脱水机 细胞芯片 微流控系统 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 两种制备方法比较 原位合成：测序、查明点突变 高密度、根据已知的DNA编制程序 制作复杂、价格昂贵、不能测定未知DNA序列 合成后交联：比较分析 制备方式直接和简单，点样的样品可事先纯化， 交联方式多样，可设计和制备符合自己需要的芯片。 中、低密度，样品浪费较多且制备前需储存大量样品。 杂交 是芯片技术中除方阵构建外最重要的一步 液相中探针与DNA片段按碱基配对规则形成双链反应。 选择杂交条件时，必须满足检测时的灵敏度和特异性。使能检测到低丰度基因，且能保证每条探针都能与互补模板杂交。 合适长度的DNA有利于与探针杂交。 温度、非特异性本底等均会影响杂交结果。 最好在封闭循环条件下杂交，杂交炉。 样本制备 制备高质量样本是困难的但又是极其重要的。制备细胞、组织或整个器官样本应特别小心。温度、激素和营养环境、遗传背景、组织成分等轻微改变都会使基因表达的结果发生明显变化。 用于基因类型分析的样本是DNA，用于表达研究的样本是cDNA。 样本制备后应进行标记，通常为酶标记、荧光标记和核素标记。 结果分析 芯片与标记的靶DNA或RNA杂交后，或与标记的靶抗原或抗体结合后，可采用下列方法分析处理数据： 共聚焦扫描仪：应用最广，重复性好但灵敏度较低。 质谱法：快速、精确，可准确判断是否存在基因突变和精确判断突变基因的序列位置。探针合成较复杂。 化学发光、光导纤维、二极管方阵检测、直接电荷变化检测等。 芯片扫读装置 根据采用的光电偶合器件，分为光电倍增管型和CCD型。 根据激光光源，可分为激光型和非激光型。 应用最为广泛的是激光光源的共聚焦扫描装置，分辨率、灵敏度极高，有良好的定位功能，可定量，应用广泛。 图象分析 复杂的杂交图谱一般需由图象分析软件来完成。 分析软件的功能：鉴定每个点阵、最大限度消除本底荧光的干扰、解析多种颜色图象、可标记或排除假阳性、识别和分析对照实验是否成功、可将信号标准化等。 图象处理软件必须具备提取基因库和数据库的能力。 质量控制 实验对照： 体外转录从cDNA合成mRNA，参入标本中作为对照。此mRNA不与点阵的核酸杂交。 将不同浓度的不同基因参入标本中，可作为标本间标准化的参照。 用两种不同吸收光谱的荧光素同时分析两个标本，如果两种荧光强度一致，可排除标本间变异因素。 用单一碱基错配的寡核苷酸做对照可排除交叉杂交。 结果有效性的证实 在表达矩阵上，有时难于区分极其相似的序列，如基因族成员，亚类或异类的存在。 比较两种不同DNA序列表达水平时，有些参数如核苷酸的成分、二级结构的存在和矩阵上DNA的长度都会影响杂交。 证实矩阵分析的结果可用RT-PCR(区别基因族成员,比较不同DNA种系表达,证实基因变异或突变和精确测定DNA表达水平)、Northern Blot(证实某一基因的相对表达水平)、Western Blot(RNA表达是否达到细胞中的蛋白水平)、质谱仪(证实矩阵结果是否在蛋白水平)等。 生物芯片技术的应用 基因表达分析：肿瘤 基因突变检测：遗传性疾病 测序、基因图绘制和多态性分析：测序 微生物菌种鉴定：毒力基因、抗药基因 药物研究：新药筛选、指导合理用药 克隆选择及文库筛选 生物芯片技术的发展 发展趋势 微型化：DNA矩阵越来越小。 集成化：矩阵上的基因组越来越大。 多样化：测定范围越来越广。 微量化：测定所需样本越来越少。 全自动化：样品制备到结果显示全部分析过程。 定量化：如激光捕获技术，显微解剖技术等可精确测定一个细胞内的一个基因的表达。 DNA矩阵数据信息库的完善。 生物芯片技术的发展 技术 毛细管电泳芯片技术 PCR芯片技术(PCR-Chip) 缩微芯片实验室(lab-on-a-chip) 微珠芯片技术(beadArray) 抗体和蛋白质阵列技术(Antibody and protein-array technology) 自我定制芯片技术（make your own chip) 血气分析芯片 毛细管电泳芯片技术 Mathies最早报道毛细管电泳芯片测序结果，在10分钟内完成了对433个碱基序列的测定。 宾夕法尼亚大学Wilding等成功地利用毛细管电泳芯片分离了用于诊断杜鑫-贝克肌萎缩的多条DNA片段。 瑞士Ciba-Geigy公司和加拿