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双水相萃取的发展 ATPE 的发展 (2) 与亲和沉淀、高效层析等新型生化分离技术实现过程集成,充分融合了双方的优势,既提高了分离效率,又简化了分离流程。 双水相萃取的发展 ATPE 的发展 (3)在生物转化、化学渗透释放和电泳等中引入双水相分配,给已有的技术赋予了新的内涵,为新分离过程的诞生提供了新的思路。 谢谢! 人有了知识,就会具备各种分析能力, 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书,广泛阅读, 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍,我们能丰富知识, 培养逻辑思维能力; 通过阅读文学作品,我们能提高文学鉴赏水平, 培养文学情趣; 通过阅读报刊,我们能增长见识,扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操, 给我们巨大的精神力量, 鼓舞我们前进。 p50 (also called NF-kB1) and p65 (RelA) were the first NF-kB proteins to be identified nature 2012年 nf-kb 25周年纪念日 ,考察了蛋白质、核酸、病毒、细胞及细胞颗粒在双水相中的分配行为 反胶团萃取也是其发现的 nature 2012年 nf-kb 25周年纪念日 nature 2012年 nf-kb 25周年纪念日 由于高聚物之间的不相溶性,即高聚物分子的空间阻碍作用,相互无法渗透,不能形成均一相,从而具有分离倾向,在一定条件下即可分为二相。一般认为只要两聚合物水溶液的憎水程度有差异,混合时就可发生相分离,且憎水程度相差越大,相分离的倾向也就大。 粘度是流体粘滞性的一种量度,是流体流动力对其内部摩擦现象的一种表示。粘度大表现内摩擦力大,分子量越大,碳氢结合越多,这种力量也越大。 * 双水相的特点 ATPE 的特点 对生物物质、天然产物、抗生素等的提取、纯化方面的优势:(1)含水量高(70%~90%),在接近生理环境的体系中进行萃取,避免生物活性物质失活或变性。 (2)可以直接从含有菌体的发酵液和培养液中提取所需的蛋白质(或酶),可直接提取细胞内酶,避免破碎或过滤等步骤。 双水相的特点 ATPE 的基本原理 (3)分相时间短,自然分相时间一般为5min~15 min。 (4)界面张力小(10-7~ 10-4mN/m),利于两相之间的质量传递。 (5)不存在有机溶剂残留问题,高聚物不易挥发,对人体无害。 双水相的特点 ATPE 的基本原理 (6)大量杂质可与固体物质一同除去。(7)易于工艺放大和连续操作,与后续提纯工序可直接相连接,无需进行特殊处理。(8)操作条件温和,在常温常压下进行。(9)亲和双水相萃取技术可以提高分配系数和萃取的选择性。 双水相的特点 ATPE 的基本原理 虽然该技术在应用方面已经取得了很大的进展,但几乎都是建立在实验的基础上,到目前为止还没能完全清楚地从理论上解释双水相系统的形成机理以及生物分子在系统中的分配机理。 双水相的特点 ATPE 的基本原理 不足之处: 如易乳化、成相聚合物的成本较高、分离效率不高等, 双水相萃取的应用 ATPE 的基本原理 双水相系统平衡时间短,含水量高,界面张力低,为生物活性物质提供了温和的分离环境。它还具备操作简便、经济省时、易于放大。据报道,系统可从10ml直接放大到1m3规模(105倍),而各种试验参数均可按比例放大,产物收率并不降低。 双水相萃取的应用 ATPE 的基本原理 英英释义 1、蛋白质、酶的纯化 2、多肽的分离纯化 3、核酸的分离纯化 4、其它分离纯化 双水相萃取的应用 ATPE 的基本原理 主要是分离蛋白质 ,酶,病毒,脊髓病毒和线病毒的纯化,核酸,DNA的分离,干扰素,细胞组织,抗生素,多糖,色素,抗体等。 双水相萃取的应用 ATPE 的基本原理 1) 蛋白质、酶的纯化 2) 多肽的分离纯化 双水相萃取的应用 ATPE 的基本原理 目前,用此法来提纯的酶已达数十种,其分离过程也达到相当规模,I-Horng Pan等人利用PEG1500/ NaH2PO4体系从Trichoderma koningii发酵液中分离纯化β-木糖苷酶,该酶主要分配在下相,下相酶活回收率96.3%,纯化倍数33。 ATPE 的基本原理 以蛋白质的分离为例说明双水相分离过程的原则流程: 包括三步双水相分离, 第一步:所选择的条件应使蛋白质产物分配在富PEG的上相中, 而细胞碎片及杂质蛋白质等进入下相。 ATPE 的基本原理 以蛋白质的分离为例说明双水相分离过程的原则流程: 包括三步双水相分离, 第二步:分相后上相中再加入盐使再次形成双水相体系,核酸和多糖则分配入富盐的下相,杂质、蛋
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