PCR技术原理及实验操作-2012摘要.ppt

用大量程的移液器移取小体积的液体 移液体积需保证在移液器所提供的量程范围之内才符合准确度和精确度数值的要求 吸取具有强挥发性的液体 如果一定要移取强挥发性的液体，应该在移液结束后立刻拆开移液器，让蒸汽挥发 移液速度和放液速度过快 慢吸慢放，不会产生气泡，移液准确 细节决定成败！ * 文字式缩写： ①P在碱基之左侧表示P在C5`上，反之，P在碱基之右侧，表示P与C3`相连。 ②有时多核苷酸中磷酸二酯键上的P也被省略，但一般左侧表示5`-磷酸端，而右侧表示3`-OH端。 * * * * * * * * * * PCR循环参数 94 ℃，3min；94 ℃，45s；58 ℃，1min； 循环30次72 ℃，1min；72 ℃，10min；16 ℃保温 （热力学参数） 1 2 3 4 5 22 55 72 94 时间（min） 温度 （℃） 适温延伸 3 高温变性 1 低温退火 2 重复1~3步 25~30轮 目的DNA片段 扩增100万倍以上 DNA双螺旋 DNA单链 与引物复性 DNA变性 形成2条单链 子链延伸 DNA加倍 94 ℃，3min；94 ℃，45s；58 ℃，1min； 循环30次72 ℃，1min；72 ℃，10min；16 ℃保温 94 ℃预变性，3min使DNA双链完全打开 退火： 58℃，1min 温度由引物长