基础生物学实验(二)_基础生物学实验(安徽大学生物研究生复试,生命科学学院)摘要.ppt

基础生物学实验(二)生态与环境技术 （ 2005） 安徽大学基础生物实验教学中心 二零零五年六月 微生物实验部分 李能树 荚荣 吴旺宝 三、材料： 1、菌种：金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌； 2、染色液：革兰氏染色液、吕氏美蓝、石炭酸复红、生理盐水、香柏油等； 3、器材：显微镜、酒精灯、接种针、擦镜纸。 四、操作步骤： 1、单染色：涂片（见图1） 自然 →干燥 通过火焰2—3次 →固定 1—2分钟→ 染色 洗水→ 水洗 自然干燥或洗水纸吸干→ 干燥 → 镜检 2、革兰氏染色（见图2）：涂片 → 干燥 →固定 1分钟→ 结晶紫 细水 →水洗 媒染1分钟 → 碘液 → 水洗 脱色 → 95%酒精 → 水洗 1—2分钟 →蕃红溶液（复染） → 水洗 →镜检。 图1 单染色操作步骤 五、结果： 七、作业：八、预习： 1。绘图（单染色和革兰氏染色的形态）； 2。实验二 细菌的芽孢和荚膜染色法 实验二 细菌的芽孢和荚膜染色法 一、实验目的： 1、继续学习微生物标本的制作方法； 2、掌握芽孢、荚膜染色的基本原理及方法。 二、原理： 芽孢、荚膜染色法都是利用细菌 各部位（分）的构造不同，它们对染料的亲和力也不同。因此，可以采用各种特殊染色方法，使细菌细胞的不同构造能在显微镜下显示出来，便于观察和区别。 三、材料： 1、菌种：枯草杆菌、钾细菌； 2、染色液：孔雀绿、蕃红溶液、碳素墨水、甲醇、生理盐水等； 3、器材：试管夹、酒精灯、接种针、载玻片、显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸等。 四、方法及步骤： 1、芽孢染色法：某些细菌（革兰氏染色阳性杆菌）生长到一定时间（对数期后期），在细胞内形成一个圆形、椭圆形或圆柱形的结构，这种结构称为芽孢，由于在细胞内也叫内生孢子。 五、绘图：六、预习： 1、绘芽孢染色、荚膜染色的结果； 2、放线菌、霉菌、酵母菌的形态观察 实验三 放线菌、霉菌、酵母菌的形态观察 一、实验的目的 学习和掌握观察放线菌、 霉菌形态的基本方法，并观 察它们的个体形态特征。 二、原理 1、放线菌：放线菌是介于细菌与丝状真菌之间而又接近于细菌的一类丝状原核生物，因菌落呈放射状而得名。 放线菌的菌落在培养基上着生牢固，不易被接种针挑取，由于孢子的存在，常使菌落表面呈粉末状。它和细菌单染色一样，可用石炭酸复红和吕氏美蓝等染料着色后，在显微镜下观察它们的形态。放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所组成的单细胞菌丝体，菌丝内无隔膜，菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝（基内菌丝）和有营养菌丝向上生长的气生菌丝，有些气生菌丝分化成各种孢子丝，呈螺旋状、波浪形或分枝状等，着生形式有丛生、互生和轮生三种。孢子的表面光滑或粗糙，圆或椭圆和干形。孢子有各种颜色。这些形态特点都是鉴别放线菌的重要依据。 三、材料 1、菌种：5406放线菌、青霉菌、黑曲霉、根霉、酵母菌； 2、染料：石炭酸复红、0.1%吕氏美蓝、乳酸石炭酸棉兰； 3、器材：载玻片、盖玻片、酒精灯、镊子、接种针、接种铲等。 四、方法及步骤 1、放线菌：用接种铲切取5406放线菌一块（带有培养基）→在载玻片上轻压一下，弃去培养基，制成印片→固定（火焰）→石炭酸复红（染色）→水洗→吸干→镜检。 扦片法：倒平板 取融化并冷至大约50℃的高氏1号琼脂约20mL倒平板，凝固待用→ 接种 用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在琼脂平板上划线接种。划线要密些，以利扦片→扦片 以无菌操作用镊子将灭菌的盖玻片以大约45°角扦入琼脂内（扦在接种线上）（图Ⅳ一7），扦片数量可根据需要而定→培养 将扦片平板倒置，28℃培养，培养时间根据观察的目的而定，通常3～5d →）镜检 用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面培养物，然后将有菌的一面朝上放在载玻片上，直接镜检。 六、作业 七、预习 绘图：绘出各种微生物的个体形态 实验四 微生物大小的测定和显微镜直 接计数法 实验四 微生物的直接计数法和大小测定 一、实验目的 1、明确显微镜计数的原理； 2、学习微生物血球计数板直接计数法，测定酵母菌细胞数； 3、掌握用显微镜测微尺测量微生物大小的