王镜岩生物化学课件004酶.pptVIP

???????? The application of enzyme has a much longer history than that of enzymatic research. 酶学研究的主要方向：一方面在酶的分子水平上揭示酶与生命活动的关系；另一方面酶的应用研究。 ①催化效率高，用量少（细胞中含量低）。 ②加快反应速度，缩短达到化学平衡的时间，但不改变化学反应平衡点。 ③降低反应活化能。 ④反应前后自身结构与数量不变。 酶催化反应速度是相应的无催化反应的108-1020倍，并且高出非酶催化反应速度107~1013倍。 少数酶是RNA（核酶） 全酶（holoenzyme)=脱辅基酶（apoenzye)+辅因子(cofactor) 例如：超氧化物歧化酶(Cu2+、Zn2+）、乳酸脱氢酶（NAD+） 金属离子的功能: 组成酶的活性中心； 是连接底物和酶分子的桥梁； 参与催化反应，传递电子； 稳定酶分子的构象； 正电荷可中和底物的阴离子，降低反应中的静电斥力等。 牛胰RNase 124a.a 单链 鸡卵清溶菌酶 129a.a 单链 胰凝乳蛋白酶 三条肽链 大肠杆菌丙酮酸脱氢酶复合体由三种酶组成： ①丙酮酸脱氢酶（E1） 以二聚体存在 2×9600 ②二氢硫辛酸转乙酰基酶（E2） 70000 ③二氢硫辛酸脱氢酶（E3） 以二聚体存在 2×56000 ? 12个E1 二聚体 24×96000 24个E2 单体 24×70000 总分子量：560万 6个E3 二聚体 12×56000 该酶是四聚体α4，每条肽链含两个活性区域：N-端区域是Asp激酶，C端区域是高Ser脱氢酶。 五、? 酶的分类及命名 淀粉酶、核酸酶、蛋白酶、脂酶、亮氨酸氨基肽水解酶 ?研究酶促反应速度，以酶促反应的初速度为准(底物消耗≤5%）。 酶的比活力是分析酶的含量与纯度的重要指标。 ?  第二节?? 酶促反应动力学 酶促反应动力学研究酶促反应的速度以及影响酶促反应速度的各种因素，包括底物浓度、酶浓度、pH、温度、激活剂与抑制剂等。 一级反应：反应速率只与反应物浓度的一次方成正比。 二级反应：反应速率与反应物浓度的二次方（或两种物质浓度的乘积）成正比。 零级反应：反应速率与反应物浓度无关而受它种因素影响而改变的反应。 Km是酶的特征常数之一，只与酶的性质、底物种类及反应条件有关，与酶的浓度无关。 Km只是对固定的底物、一定的pH、一定的温度而言。不同条件下具有不同的Km值。 不同的酶， Km不同； 同一种酶与不同的底物作用时， Km不同； 同一种酶与相同的底物作用时，作用条件不同（pH、温度及有无抑制剂等）， Km不同； 8. Km和Vmax的求解方法（ 双倒数作图法） 蔗糖酶米氏常数（Km）的测定 1. 配12支蔗糖底物溶液，浓度分别为0、0.005、0.00625、0.0075、0.00875、0.010、0.0125、0.015、0.02、0.025、0.0375、0.050M，在35℃水浴保温； 2. 加入3U/ml已在35 ℃水浴保温的酶溶液，准确作用5分钟，终止反应； 3. 各吸取0.5ml反应液与3，5-二硝基水杨酸，沸水浴5分钟，冷却后在540nm测定吸光度OD值； 4. 作图 三、? 多底物的酶促反应动力学 2、 随机反应机理（random reactions) (random Bi Bi ) 3、乒乓反应机理 Ping pong reactions （double-displacement reactions) 4、双底物反应的动力学方程 序列机制的底物动力学方程 四、酶浓度对反应速率的影响 当[S][E]，反应速度与酶浓度成正比。 ①影响酶蛋白构象，过酸或过碱会使酶变性。 ②影响酶和底物分子解离状态，尤其是酶活性中心的基团或维持其构象的基团的解离状态，从而影响ES的形成。 ③影响酶和底物分子中其他一些基团解离，这些基团的离子化状态影响酶的专一性及活性中心构象。 2、酶的最适pH和稳定性pH ★不同的离子激活不同的酶。 ★不同离子之间有拮抗作用和可替代作用，如Na+与K+、Mg+与Ca+之间常常拮抗，但Mg+与Zn+常可替代。 ★ 激活剂的浓度要适中，过高往往有抑制作用，通常在1~