2013年细胞培养任杰第1章….ppt

* 其他用品 离心管（收集细胞用）， 试管（放置试剂或临时插置吸管用）， 玻璃或不锈钢容器（放吸管以便消毒）， 饭盒（存放小件培养物品便于高压消毒） 橡胶吸头（套于吸管顶部） 胶塞，盖子 安瓿或冻存管（冻存细胞） 注射器，烧杯，量筒及漏斗， 乙醇灯 微型喷壶（呈放消毒液） * 常用的基本设备 （2）器械： 主要用于解剖、取材、剪切组织及操作时持取物件。 常用：手术刀或解剖刀、手术剪或解剖剪等。 * 特 殊 设 备 酶联免疫检测仪 超低温冰箱 旋转培养器 荧光显微镜 流式细胞仪 * 组织培养室的设施及条件 压力蒸汽消毒器：湿热消毒。用途广 电热干燥箱：干热消毒（160℃，2小时）。主要用干玻璃器皿消毒 滤器：过滤除菌。大多数培养用液，如人工合成培养基、血清、酶液等均采用滤过法除菌 超净工作台：为细胞操作提供无菌环境 紫外灯 ：紫外线消毒。主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒 * 培养用品的清洗和消毒灭菌 细胞培养需要大量消耗性物品，如玻璃器皿、金属器皿、塑料、橡胶制品、布类、纸类等，因此掌握清洗、消毒知识，学会清洗、消毒方法是从事细胞培养工作必须的。 * 培养用品的清洗 一、清洗 离体条件下，有害物质直接同细胞接触，细胞对任何有害物质十分敏感，极少残留物都可以对细胞产生毒副作用。因此，新的或重新使用的器皿都必须认真清洗，达到不含任何残留物的要求。  * 1.浸泡:新的或用过的玻璃器皿要先用清水浸泡，软化和溶解附着物。新玻璃器皿使用前得先用自来水简单刷洗，然后用5％盐酸浸泡过夜；用过的玻璃器皿往往附有大量蛋白质和油脂，干涸后不易刷洗掉，故用后应立即浸入清水中备刷洗。 （一）玻璃器皿的清洗 一般经过浸泡、刷洗、 浸酸、和清洗四个步骤。  * 2. 刷洗:将浸泡后的玻璃器皿放到洗涤剂水中，用软毛刷反复刷洗。不要留死角，并防止破坏器皿表面的光洁度。将刷洗干净的玻璃器皿洗净、晾干，备浸酸。  * 3.浸酸:浸酸是将上述器皿浸泡到清洁液中，又称酸液，通过酸液的强氧化作用清除器皿表面的可能残留物质。浸酸不应少于六小时，一般过夜或更长。放取器皿要小心。  * 清洁液的配制 组成 强度 重铬酸钾 （克） 浓硫酸 （毫升） 蒸馏水 （毫升） 弱液 100 100 1000 次强液 120 200 1000 强液 63 1000 200 * 4.冲洗:刷洗和浸酸后的器皿都必须用水充分冲洗，浸酸后器皿是否冲洗的干净，直接影响到细胞培养的成败。手工洗涤浸酸后的器皿，每件器皿至少要反复“注水－倒空”15次以上，最后用重蒸水浸洗2－3次，晾干或烘干后包装备用。  * （二）玻璃滤器的清洗： 自来水漂洗。 自来水抽滤3-5遍至无白沫，水滴滤过液。 清洁液抽滤1遍，清洁液滴滤过液。 自来水漂洗抽滤5遍，水滴滤过液。 蒸馏水抽滤3遍，蒸馏水滴滤过液。 三蒸水抽滤2遍，三蒸水滴滤过液，漂洗。 烤干备用。 * （三）橡胶制品清洗 新的橡胶制品洗涤方法：0.5mol/L NaOH煮沸15分钟，流水冲洗，0.5mol/L HCl煮沸15分钟，流水冲洗，自来水煮沸2次，蒸馏水煮沸20分钟，50℃烤干备用。  * （四）塑料制品的清洗 塑料制品特点：质软、易出现划痕；耐腐蚀能力强、但不耐热。 清洗程序：使用器皿后立即用清水清洗，浸于自来水过夜，用纱布或棉签和50℃清洗液刷洗，流水冲洗，晾干，浸于清洁液15分钟，流水冲洗（15－20遍）,蒸馏水浸洗三次，双蒸水泡24小时，晾干备用。 * 二 包装: 对细胞培养用品进行消毒前，要进行严密包装，以便于消毒和贮存。常用的包装材料：牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、较大培养皿等，近几年用铝箔包装，非常方便，适用。培养皿、注射器、金属器械等用牛皮纸包装后再装入饭盒内，较大的器皿可以进行局部包扎。  * 二、消毒和灭菌  微生物污染是造成细胞培养失败的主要原因。  * （一）物理消毒法 1.紫外线消毒:紫外线是一种低能量的电磁辐射，可杀死多种微生物。革兰阴性菌最为敏感，其次是阳性菌，再次为芽孢，真菌孢子的抵抗力最强。紫外线的直接作用是通过破坏微生物的核酸及蛋白质等而使其灭活，间接作用是通过紫外线照射产生的臭氧杀死微生物。直接照射培养室消毒，用法简单，效果好。 紫外灯的消毒效果同紫外灯的辐射强度和照射剂量呈正相关，辐射强度随灯距离增加而降低，照射剂量和照射时间呈正比。因此紫外灯同被照射物的距离和照射时间要适合。离地面2米的30W灯可照射9平方米房间，每天照射2－3小时，期