2_土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》(课件).pptVIP

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 　　为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ 　　 因为土壤中各类微生物的数量(单位：株/kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。 　　测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养；测定放线菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释；测定真菌的数量，一般选用102、103和104倍稀释。 注： 样品的稀释 将10g土样加入盛有90mL无菌生理盐水的锥形瓶中,充分摇匀，吸取上清液1mL，转移至盛有9mL水的无菌试管中，依次等比稀释至107稀释度，并按照由107至103稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。　 实验步骤 3.微生物的培养与观察 　　将涂布好的培养皿放在30℃下培养。比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。 　　挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养基的斜面中，观察能否变红。 　　不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在30~37℃的温度下培养1~2d；放线菌一般在25~28℃的温度下培养5~7d；而霉菌一般在25~28℃的温度下培养3~4d。 注： 　　一般来说，在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养时间)，同种微生物表现出稳定的菌落特征。 2014年上学期 湖南长郡卫星远程学校 制作 13 两个主要目的： 　　(1)从土壤中分离出能够分解尿素的细菌； 　　(2)统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。 水生耐热细菌Taq ( Thermus aquaticus ) 耐高温的Taq DNA聚合酶 美国微生物学科布鲁克（T.Brock) 1966年发现耐热细菌 研究思路 （一）筛选菌株 尿素分子的立体结构 CO(NH2)2+H2O CO2+2NH3 脲 酶 分解尿素的细菌: 培养基配方 1.0g 尿素 15.0g 10.0g 0.2g 2.1g 1.4g 葡萄糖 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000mL 琼脂 MgSO4·7H2O Na2HPO4 KH2PO4 　　在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 选择培养基 背景知识 测定微生物数量的方法： 1．直接计数法： 　　最常用显微镜直接计数法。 测定微生物数量的方法： 背景知识 1．直接计数法： 　　最常用显微镜直接计数法。 　　先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数。 测定微生物数量的方法： 背景知识 优点：　　设备简单、能观察微生物的形态特征。 优点：　　设备简单、能观察微生物的形态特征。 缺点：　　难以计数微小量多的细菌。　　 一般用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。 2．间接计数法： 　　最常用稀释平板计数法。　　 （二）统计菌落数目 （二）统计菌落数目 统计菌落数目的理论依据： 　　当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30～300的平板进行计数。 每克样品中的菌株数 = (C÷V)×M C：某一稀释度下平板上生长的平均 菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积 (ml) M：稀释倍数 　　统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。 注意： 　　 两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。 　　1.第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 　　2.第二位同学在该浓度下涂布了三个平板，统计的菌落数分别为21、212和256，该同学以这三个平板菌落数的平均值163作为统计结果。 实例1 　　你认为哪位同学的结果更接近真实值？这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？ ? 　　第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置