2.2动物细胞工程讲解.pptVIP

4、动物细胞培养过程中几个重要的概念 1. 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上（单层）。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 2. 接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 3.原代培养 (primary culture) 定义：把第1代细胞的培养与传10代以内的细胞培养统称为原代培养。 定义：当原代培养的细胞生长停止，这时如果要使细胞继续生长，就要及时用胰蛋白酶等，使细胞从瓶壁上解离下来，然后加入新的培养液，将细胞分离稀释，并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内，这个过程称传代培养 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、微量元素等） 3、温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。  动物细胞的特点？ 分化潜能变窄：随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄，这是指整体细胞而言。 细胞核仍具有全能性：细胞核，它含有保持物种遗传性所需的全套基因，而且并没有因细胞分化而丢失基因，因此高度分化细胞的细胞核仍具有全能性 5、体细胞核移植技术存在的问题 1.动物细胞培养要经过脱分化吗？为什么？ 2.体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 5.什么叫单层细胞培养 1957年，科学家采用胰蛋白酶消化处理和应用液体培养基的方法，获得了单层细胞培养。单层培养法的出现，对细胞培养的发展起了很大的推动作用。 6.去核的方法有哪些？ 目前核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作去核法。还有人采用其他方法，如梯度离心、紫外光短时间照射、化学物质处理等。这些方法是在没有刺破透明带或卵母细胞质膜的情况下，去除细胞核或使卵细胞核DNA变性，从而达到去核目的。 4、单克隆抗体的应用 思考： 1、什么叫动物细胞融合？其原理是什么？ 2、促进细胞融合的方法有哪些 ?　 3、细胞融合技术最大的优点是什么？ 4、植物体细胞杂交与动物细胞融合有哪些异同？　 三 动物细胞融合（细胞杂交） 1.过程： 比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的异同 用 途 诱 导 方 法 融合前处理 原 理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性 细胞膜的流动性 用纤维素酶、 果胶酶去壁 用胰蛋白酶 使细胞分散 物理、化学方法 物理、化学、 生物方法 获得部分 或完整植株 主要用于制备 单克隆抗体 回 顾 1、抗体的化学本质？ 2、抗体由什么细胞产生？ 3、抗体的作用特点？ 4、抗体的分布？ 四 单克隆抗体 思 考：如何获取某种特定抗体？ 1、抗体的传统生产方法 再从动物血清中分离抗体 该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。 输入 浆细胞 动物体内 某抗体 某抗原 思考与探究： 如何获得大量化学性质单一、特异性强的抗体？ 一个B淋巴细胞——只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞——能无限增殖 杂交瘤细胞 既能分泌一种特异性抗体 又能无限增殖 1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒设想： 2、单克隆抗体的制备过程 1）在从小鼠体内取B淋巴细胞前应对小鼠作何种处理？为什么要这样处理？ 2）从小鼠何处获取B淋巴细胞？ 3）如只考虑两两融合，可能出现哪些融合类型细胞？ 4）是否所有杂交瘤细胞都能产生某一特定抗体？ 5）由特定的B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合成的杂交瘤细胞具有什么特点？ 6）最后可以通过哪些途径大量获取抗体？ 7）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合? 小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖， B淋巴细胞能够产生抗体， 细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活 8）、骨髓瘤细胞是癌细胞吗? 有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞， 具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞， 所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。 2、单克隆抗体的制备过程 思考与探究： 如何获得能产生特异抗体的杂交瘤细胞呢？ 杂交细胞 灭活的病毒等手段 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 经免疫的小鼠 提取 杂交