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第一章 培养基灭菌 微生物的热死动力学 湿热灭菌：直接用高温蒸汽灭菌。蒸汽在冷凝时释放出大量潜能，并且蒸汽具有强大穿透力，蒸汽的湿热破坏菌体蛋白质和核酸的化学键，使酶失活，微生物因代谢障而死亡。 湿热灭菌的效果，取决与致死温度和致死时间。 致死温度：杀灭微生物的极限温度。 致死时间：在致死温度下杀灭全部微生物所需时间 热阻（对热抵抗力）：微生物在某一特定条件的死亡时间。 相对热阻：指在相同条件下两种微生物热阻的比值 芽孢的热阻特别高的原因： 1）芽孢具有吡啶二羧酸，能增强对热抵抗力 2）芽孢厚而且结构致密，热不易透过 3）芽孢的游离水分少，蛋白质含水量较营养细胞蛋白质含水量低。 工业上湿热灭菌分为分批灭菌和连续灭菌 分批灭菌（实消）： 将培养基置于反应器中用蒸汽加热，达到预定灭菌温度后维持一定时间，再冷却到发酵温度，然后接种发酵 连续灭菌（连消）： 将培养基在罐外连续进行加热、维持和冷却然后进入到反应器的杀菌方法 对数残留定律： 在一定温度下，微生物的受热死亡符合单分子反应动力学即微生物的热死亡速率与任一瞬间残存的活菌数成正比。 热死灭动力学方程 dN/dt =-KN 式中： N------- 残存的活菌数（个） t-------- 灭菌时间（min） K------- 杀菌速率常数（min-1）或叫死亡速率常数K是判断微生物受热死亡难易程度的基本依据，其大小与微生物的种类和加热温度有关。 dN/dt------- 菌的瞬时变化率，即死亡速率。 温度对杀菌速率常数K的影响 微生物受热蛋白质变性而死亡，温度对杀菌速率常数的影响可以用阿累尼乌斯（Arrhenins)方程表示：K=Ae-E/RT K----杀菌速率常数（死亡速率常数）（min-1） A----频率因子（阿累尼乌斯常数）因菌种的不同而异 E-----活化能（J/mol） T-----绝对温度（K）T= t +273.15 R-----气体常数 8.36J/mol.K(或1.98cal/mol.K) 从阿累尼乌斯方程可以得出以下结论： 1）活化能E的大小对K值有重大影响，其他条件 相同时E愈高，K值愈低，热死速率愈慢。 2）不同菌的孢子热死反应的E可能各不相同，在 相同T灭菌，尚不能肯定E低的孢子的死亡速度一 定比E高的快，因为K并不是唯一决定于E。 3）对方程两边取对数得： lnK= - E/RT + lnA 在不同的温度T下做灭菌实验，求得相应的K值，按lnK----1/T作图，从直线的斜率可以求出E。 4）K是E和T的函数，K对T的变化率与E有关。 反应的活化能E愈高，温度T的变化对K的影响愈大 对上式两边求导数得：dlnK/dT=△E/(RT2) 培养基的分批灭菌 将配制好的培养基输入发酵罐中，用蒸汽加热，使培养基和设备同时灭菌的一种灭菌方式，又称实罐灭菌。 ? 灭菌过程 过程包括升温、保温和冷却等三个阶段 各阶段对灭菌的贡献：20%、75%、5%。 培养基的升温可由两种方式实现：间接加热，在夹套或蛇管中通入蒸汽加热；直接加热，在培养基中直接通入热蒸汽加热。 灭菌过程中加热和保温阶段的灭菌作用是主要的，而冷却阶段的灭菌作用是次要的，一般很小，可以忽略不计。 此外，应当避免长时间的加热阶段 因为加热时间过长，不仅破坏营养物质，而且也有可能引起培养液中某些有害物质的生成，从而影响培养过程的顺利进行。 ?? 将配制好的并经预热（60～75℃）的培养基用泵连续输入由直接蒸汽加热的加热塔，使在短时间内达到灭菌温度（126～132℃）。 然后进入维持罐（或维持管），使在灭菌温度下维持3～7分钟后再进入冷却管，使其冷却至接种温度并直接进入已事先灭菌（空罐灭菌）过的发酵罐内。其温度一般以126～132 ℃为宜，总蒸汽压力要求达到0.044～0.049 MPa以上。 培养基采用连续灭菌时，需在培养基进入发酵罐前，直接用蒸汽进行空罐灭菌（空消）用无菌空气保压，待培养基流入罐后，开始冷却。 灭菌时对培养基的加热可采用各种加热器。 培养基的冷却方式有喷淋冷却式、真空冷却式、薄板换热器式几种方式，其过程均包括加热、维持和冷却阶段。 分批灭菌与连续灭菌的比较 分批灭菌的优点和缺点 优点 设备要求低，不需另外设置加热、冷却装置； 操作要求低，适于手动操作，适合于小批量生产规模 适合于含有大量固体物质的培养基的灭菌。 缺点 培养基的营养物质损失较多，培养基的质