第七章含量测定HPLC精要.ppt

高效液相色谱法 回答下列问题： 系统适用性试验参数__、___、___、____。 提取的方法是____________。 分离精制方法是____________。(如果有） 取样范围是____________。 计算： m= V= D= * * 第七章 中药制剂的含量测定技术 第七章 中药制剂的含量测定技术 第七章 中药制剂的含量测定技术 * 第七章 中药制剂的含量测定技术 【学习目标】 知识目标 掌握高效液相色谱法、薄层扫描法、高效液相色谱法、气相色谱法测定中药制剂含量的原理和方法 熟悉紫外-可见分光光度计、薄层扫描仪、液相色谱仪、气相色谱仪的工作原理、使用方法及操作注意事项 了解容量分析法和挥发油测定法的原理和方法 技能目标 熟练掌握高效液相色谱法、薄层扫描法、高效液相色谱法、气相色谱法的测定中药制剂含量的基本操作和技能 学会正确查阅《中国药典》，学会正确选取仪器、试药，学会配制试液，学会计量器具和检验仪器的操作，规范操作，并学会正确计算、处理各种数据、判定检测结果 * 讲授内容 高效液相色谱法 简述 方法 应用实例 薄层扫描法 简述 方法 应用实例 高效液相色谱法 简述 方法 应用实例 气相色谱法 简述 方法 应用实例——川贝枇杷糖浆 容量分析法 北豆根片中总生物碱的测定 克痢痧胶囊中雄黄的测定 万氏牛黄清心丸中朱砂的测定 其他分析法 挥发油测定法 氮测定法 《中国药典》一部含量测定方法汇总表 * 类别 分析方法 品种数 项目数 新增项 仪器分析法 高效液相色谱法 850 956 709 气相色谱法 50 52 24 薄层扫描法 29 29 12 高效液相色谱法 17 17 8 原子吸收分光光度法 2 2 1 化学分析法 滴定分析 27 27 9 氮测定法 11 11 9 挥发油测定法 4 4 1 重量法 3 3 0 鞣质测定法 1 1 1 HPLC的特点和应用 “三高” “一快” “一宽” 高柱效——n=104片/米，柱效高（LC） 高灵敏度 高选择性 分析速度快 应用范围广泛（可分析80%有机化合物） 溶解后能制成溶液的样品 不受样品挥发性和热稳定性的限制 分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型样品均可检测 用途广泛，占有机物的80% 　　 * 高效液相色谱法 高效液相色谱法 含量测定方法：外标法、内标法、 外标法结果准确，精密度高，但要求进样量必须准确，仪器必须有良好的稳定性。 外标法的定量依据是待测组分色谱峰的峰面积或峰高与其浓度或质量在一定范围内成线性关系，按药品标准方法制备供试品溶液和对照品溶液，分别将供试品溶液和对照品溶液注入液相色谱仪，测定供试品和对照品中待测组分色谱峰的峰面积或峰高，按正比关系计算供试品溶液的浓度。 * 高效液相色谱法 * 系统适用性试验 理论板数（n） 色谱柱的效能 一般为待测组分或内标物质的理论板数 分离度（R） 分离程度，衡量色谱系统效能 分离度应大于1.5。 重复性 连续进样后，色谱系统响应值的重复性能 外标法：峰面积测量值的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0% 内标法：校正因子的相对标准偏差应不大于2.0%。 拖尾因子（T） 评价色谱峰的对称性 除另有规定外，T应在0.95～1.05之间 高效液相色谱法--外标法 供试品溶液和对照品溶液的制备 供试品溶液和对照品溶液均应制备2份 供试品溶液应用0.45μm的滤膜滤过 流动相的制备 试剂，一般用色谱纯；水应为新鲜配制的高纯水 凡规定PH值的流动相，应使用精密PH计进行调节，偏差一般不超过±0.2PH单位 应通过0.45μm滤膜滤过 使用前须脱气 常用甲醇-水或乙腈-水为底剂的溶剂系统 色谱柱的选择和保存 反相键合相色谱：十八烷基硅烷键合硅胶（ODS或C18） * 含量测定—外标法 C供：供试品溶液的浓度； A供：供试品的峰面积或峰高； A对：对照品的峰面积或峰高； C对：对照品溶液的浓度。 * 高效液相色谱法 实例：三黄片（小片）中大黄的测定 大黄素 大黄酚 * 高效液相色谱法 高效液相色谱法 实例：三黄片（小片）中大黄的测定 【含量测定】大黄 照高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1%磷酸溶液（85:15）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于2000。 对照品溶液的制备 取大黄素对照品和大黄酚对照品适量，精密称定，加无水乙醇-乙酸乙酯（2:1）混合溶液制成每1ml含大黄素10μg、大黄酚25μg的混合液，即得。 供试品溶液的制备 测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品每片含大黄以大黄素（C15H10O5）和大黄酚（C15H