基因检测在肿瘤个性化诊疗中的应用.ppt

指导靶向用药 赫赛汀只有针对HER-2基因扩增和蛋白过度表达的病人才有效预后判断 预后判断 研究显示，HER-2基因扩增患者生存期较短，肿瘤负荷更大，淋巴结转移几率更高，激素受体阴性比例更高，复发风险更高 标本采集要求 ctDNA管子及标本采集要求 采用专用ctDNA BCT管采血8～10ml 轻轻倒转8-10次 4-37℃常温保存和运输，严禁冷藏（冻）！ ctDNA可以对手术切除后的患者进行微小残留的检测以评估复发的风险 APC G4189T 作为突变参考指标 a）手术前：突变DNA含量为13.4% b）手术后（3天），突变DNA片段降至0.015% c）手术后（48天）突变DNA含量升至0.11% d）244天后，升至0.66% Diehl F, et al: Circulating mutant DNA to assess tumor dynamics. Nat Med 14:985-990, 2008 3、复 发 监 测 乳腺癌、胃癌的靶向治疗 HER-2 抑制剂 曲妥珠单抗（赫赛汀?） HER-2扩增检测的应用 辅助诊断 FISH技术检测HER-2状态结果客观准确，为检测HER-2基因的金标准。 制定治疗方案 HER-2基因扩增患者：应用他莫昔芬治疗后的死亡风险明显增高，提示患者可能不适合他莫昔芬作为内分泌治疗的选择； HER-2基因扩增患者：对CMF化疗方案的反应性降低,宜采用高剂量强度的蒽环类药物方案。 乳腺癌：HER2扩增阳性率25%左右（荧光原位杂交技术） NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology for breast cancer.v1.2014. 胃癌：HER2 扩增阳性率约15%~27% （荧光原位杂交技术）； 各类型胃肿瘤 HER2 阳性率： 食管胃结合部腺癌（33%）、胃腺癌（21%）、 肠道及弥漫型肿瘤（32%）、混合型肿瘤（6%） 乳腺癌：HER2扩增阳性率约20%~25%（荧光原位杂交技术） NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology for breast cancer.v1.2014. NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology for gastric cancer.v2.2013. 标本来源：组织标本（以乳腺癌为主） 方法学：FISH方法 标本量：检测2560例，阳性结果：1050例 金域检验结果 阳性率：41.02% 结直肠癌驱动基因分布 爱必妥和维克替比仅适用于KRAS基因野生型的转移性结直肠癌患者 KRAS突变是早期NSCLC患者无法从辅助化疗中获益的预测因子 标本来源：组织标本（以结直肠癌为主） 方法学：ARMS-PCR、Sanger测序 标本量：检测1618例 阳性结果：614例 金域检验结果荟萃 阳性率：38% 部分晚期患者无手术机会 无足够的组织标本进行基因分型 重复活检患者依从性差 作为金标本的组织靶基因检测也存在局限性一、取材困难 二、肿瘤异质性 同一肿瘤组织有异质性 不同部位肿瘤的异质性 三、无法对疗效进行监测 组织标本无法用于动态检测 Liquid Biopsies（液相活检） Blood other bodily fluids ?Cell-free DNA （血浆游离DNA） ?Circulating tumor DNA （循环肿瘤DNA） 有限的样本数量 有限的取样频率 取样时需要专业医生和专业机构 有创伤地取样 检测速度慢 目前实体肿瘤个体化治疗面临的困境 ctDNA的生物学属性 —— 来源 总游离DNA 上皮组织 5-10% 肿瘤 0.01-10% 胃肠道 5-10% 血细胞 80-90% largely 1.0% ctDNA的生物学属性 —— 含量 血浆 ? 水 91% ? 蛋白 7% ? 代谢物 (微量) ? Cell-free DNA (微量) 细胞层 ? 白细胞2-3% ? 血小板块 2-3% ? 红细胞90% ? CTC(微量) ctDNA的生物学属性 —— 存在部位 特殊保存方式 抑制核酸酶介导的ctDNA降解 防腐剂稳定有核血细胞 ctDNA分子标记物存在周期短，能实时反应患者的基本情况 ctDNA的生物学属性 —— 半衰期短 ctDNA的生物学属性 —— 高特异性 “相对”准确反应肿瘤组织不同