猪瘟病毒研究进展详解.docVIP

猪瘟病毒研究进展 摘要： 猪瘟（CSF）是一种高度接触传染性致死性疾病，对家猪和野猪都有危害。猪瘟的爆发能够对养猪业造成重大的经济损失。防控和净化该病的主要策略是通过系统的疫苗免疫和免疫稳定后的不免疫净化策略。对于该病防控及净化措施的探索使得学术界和养猪界取得了长足的进步，并且通过不间断的探索，我们对CSFV的复制机制、毒力有了明确的认识，并有助于我们研发相应的疫苗。该综述中，我们对最近在CSFV流行病学、基因组分子结构与特征、病毒毒力的分子机制及抗病毒技术的发展等方面的最新研究成果进行综述。 关键词：CSFV、流行病学、反向遗传学、猪瘟病毒生存期、蛋白质功能、病毒毒力 1 猪瘟的流行特点和免疫策略 猪瘟（CSF、HC）是一种高度接触传染性致死性疾病，对养猪业造成了重大经济损失。该病被OIE陆生动物卫生法典列为必须通报的疾病。该病最早于1810年在美国田纳西州被发现，随后迅速传播至世界各地。该病在加拿大（1963）、美国（1978）、澳大利亚和新西兰等国已被成功净化，但是仍肆虐在亚洲国家、南美、东欧以及部分前苏联国家。该病的病原是猪瘟病毒（CSFV），属于黄病毒科瘟病毒属成员，与牛病毒性腹泻病毒（BVDV）及边界病毒同属一科。控制CSFV的策略主要包括两个方面，即扑灭措施（不免疫）和系统的免疫净化措施。在采用不免疫策略时，猪瘟疫情的爆发会给高密度养猪区域带来重大经济损失。因此，在除了欧盟之外的许多国家都是用系统的免疫和免疫后净化策略来控制CSFV。例如，中国当前采取的即是免疫净化策略，国家规定养猪区域每年的免疫密度必须达到90%以上。自1904年该病的病原被定性为病毒以后，许多CSFV疫苗被研发。改良活疫苗（通过在非易感宿主体内连续传代得到的减毒活疫苗）被大量使用，其中最主要的毒株是商品化的C株疫苗，该毒株相对其他毒株而言具有安全高效的特点。C株疫苗能够上调抗体水平，并且能够活化T细胞的免疫应答，而基于E2蛋白的亚单位疫苗仅仅能够诱导一种抗CSFV的抗体产生。 通过对CSFV毒株的进化分析得知，该病毒分为三种基因型，其中又分为高毒力毒株、中等毒力毒株和低毒力或无毒力毒株（大多数疫苗株）。高毒力毒株和改良的或疫苗毒株都属于基因1型，而基因2型和3型毒株具有较低的毒力。如我们之前报道的一样，基因1型CSFV在田间能够发生多种突变，发生在欧洲和亚洲的基因2型CSFV疫情越来越多。这种现象表明来源于基因1型毒株的E2亚单位疫苗可能不能对基因2型毒株的高毒力CSFV产生有效的保护作用。C株疫苗在很长一段时间内应该都是有效的，得益于它能够诱导T淋巴细胞免疫。GPE毒株疫苗在猪体内传代后毒力有返强现象。C株疫苗的毒力不能通过连续的猪与猪之间的传播试验而返强，但是该毒株能够与田间流行毒株发生基因重组，从而产生新的特性未知的毒株。基于以上的研究结果，对DIVA标记的基因2型疫苗的研制显得特别重要，这有助于我们对CSFV进行控制和净化。该产品的实现依赖于对反向遗传系统的操作和对CSFV蛋白功能的了解。 2 反向遗传系统和CSFV毒力研究 2.1 反向遗传系统 反向遗传学（RG）能够建立一种有着全长病毒基因拷贝的病毒，该方法是现代病毒学研究中一种强有力的手段。RG在探究病毒的复制、感染、病毒蛋白的功能、重组的发生率、病毒与宿主的相互作用、抗病毒研究及标记疫苗研究等方面发挥重要作用。截至目前，已有至少五种拯救CSFV病毒的方法，这些方法从很大程度上促进了CSFV研究的进程。1996年的一项极具重要性的研究报道了一种体外转录系统，研究发现，SK6细胞系在被转染了体外转录得到的RNA后拯救得到了感染性的CSFV。然而，体外转录的RNA的含量很低，随后，四种更好的反向遗传系统被构建，一是Fan等于2009年报道的BHK-21细胞的转染效率是PK15细胞的10倍之多，他们创建了一种新的程序，使用高效转染的细胞（BHK-21）转染体外合成的RNA，利用PK15 IX细胞评价BHK-21细胞（没有CSFV受体）和PK15细胞（有CSFV受体）的转染效率，结果发现，将被感染的PK15细胞的上清作用后，相比于只用体外转录的RNA 转染PK15细胞，能够提高8倍的效率。二是Van Gennip等于1999年研究出的一种新奇的、更加方便高效的体内转录系统，该系统与体外转录系统相比能提高200倍左右的病毒量，他们建立了一种稳定的能表达T7 RNA聚合酶（SK6-T7RNApol）的猪肾细胞系，并且将一种线性化的质粒DNA转染进了SK6-T7RNApol中。三是Bergeron and Perreault于2002年插入了丁型肝炎病毒核糖酶以发挥其催化形成准确的3′非编码区的作用。病毒的3′非编码区在一种重要的叫做SrfI的酶的帮助下能够规避模板DNA的线性化（Zou et