第八章几种显微技术的应用.pptVIP

荧光显微镜标本制作要求 载玻片 　载玻片厚度应在0.8～1.2mm之间，太厚的坡片，一方面光吸收多，另一方面不能使激发光在标本上聚集。 盖玻片 　盖玻片厚度在0.17mm左右，光洁。为了加强激发光，也可用干涉盖玻片，即表面镀有氟化镁的盖玻片，它可以使荧光顺利通过，而反射激发光，这种反射的激发光又可激发标本。 * 标本 　组织切片或其他标本不能太厚。如太厚激发光大部分消耗在标本下部，而物镜直接观察到的上部不充分激发。另外，细胞重迭或杂质掩盖，影响判断。 封片剂 　封片剂常用甘油，必须无自发荧光，无色透明，荧光的亮度在pH8.5～9.5时较亮，不易很快褪去。所以，常用甘油和0.5mol/L pH9.0～9.5的碳酸盐缓冲液的等量混合液作封片剂。 镜油 最好使用特制的无荧光镜油。 * 使用荧光显微镜的注意事项 　1.严格按照荧光显微镜要求进行操作，不要随意改变程序。 　2.点燃超高压汞灯5～15min，待光源发出强光稳定后，再开始观察标本，最好在暗室中进行。 　3. 在调整光源时应戴上防护眼镜，防止紫外线对眼睛的损害。 　 * 4.检查时间每次以1～2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，另外，标本受紫外线照射3～5min后，荧光也明显减弱。 5.荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节省时间，保护光源。 　6.标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。 * 体视显微镜的原理及操作技术 用途： 主要用于实体解剖、观察。 特点： 1.像是正立的。 2.有两个物镜，其夹角为12-15°，使标本具立体效果。 3.工作距离长。 * * 4.焦深大，放大倍数较小，最大放大倍数为240倍。 5.物镜镜口率小，分辩率低。 6.照明方式有两种，一种是用侧光源从一侧或两侧斜照射；另一种是透射式照明，透射式照明有明暗视野之分。 7.主体上具有连续放大旋钮。 * 操作程序 观察 1．打开电源开关，向前推动提高电压。 2．转换观察光路，即明视场和暗视场转换。 3．将标本放于载物台上，光线若太暗或不均匀，可在旁边用侧光照明。 4．进行瞳距调节。 5．进行左右眼曲光度校正。 * 6.将连续变倍旋钮放在最低倍。 7.调焦，观察。 8.增大连续变倍的倍数，重新调节焦距。 9.调节孔径光阑的大小，使像达到最清晰。 10.进行标本观察与解剖。 * 倒置生物显微镜的使用 XDS系列倒置生物显微镜特点和用途 特点 具有长工作距离的平场消色差物镜、长工作距离的聚光镜，具有相衬装置。 用途 适合于附着在培养皿底或悬浮在培养基中的活体观察，是细胞培养、组织培养及微生物研究的必备仪器。 * 视场光阑 滤光片 孔径光阑 调中旋钮 摄影拉杆 环板插孔 * 操作技术 1.将亮度调至最小，打开开关，再将亮度调至适中。 2.将标本置于载物台上，将低倍物镜置入光路，通过目镜观察，使用粗、微调焦手轮使标本成像清晰。 * 3.调整双目瞳距与观察者瞳距一致。 4.聚光镜位置和中心调节。 5.孔径光阑调节。 * 6.调整并列的三个灯源调节手柄，使灯丝成像于孔径光阑正中(可临时放一白色纸片在聚光镜保护玻璃上观察)。 7.滤色片选择 8.将高倍物镜置入光路，用右目镜观察，调整微动手轮使成像清晰。用左目镜观察，调整视度调节圈使成像清晰。 * 灯位调节 * 相衬观察 1.将环板片插入聚光镜相应插孔中。 2.孔径光阑升至最大。 3.将相应放大倍数的相衬物镜置入光路。 4. 在一个目镜筒中换用对中目镜观察，调节对中目镜的视度调节圈，并稍调节聚光镜升降手轮，使环板上的亮圈和相板上的暗环成像同时清晰。 5.转动环板座调节螺钉，使环板和相板的中心重合。 6. 取下对中目镜，换上广角目镜，即可进行相衬观察。 * 第八章 几种显微技术的应用 明视场研究用显微镜的操作技术 镜检顺序 1.打开主电源开关 ，在打开之前，应先将右侧电压升降拉杆放在最低处，再打开主机开关，并逐步升高电压。 底座上发光二极管可显示当前电压值。 * * * 2.把标本固定在载物台上 3.用10X物镜对焦，将10X物镜引入光路，先粗调，再微调达到最清晰。 4.双目镜筒间距和视度差的调节 5.根据要求放大倍数，旋转物镜转换器，使所选物镜进入光程，再进行微调，使标本清晰。光亮不足，可增大电压或取掉ND滤光片。 * 聚光镜的调节 聚光镜位置调节 ①缩小视场光阑，视场中出现一个正多边形，若边缘不清楚，表明聚光镜的位置不合适。 ②慢慢向上或向下调整聚光镜，使多边形边缘逐渐达最清楚；这样聚光镜就处于正确位置。 视场光阑处于最大状态