四、蛋白质的提取.ppt

（三）蛋白质的提取和分离纯化 大多数蛋白质可溶于水、稀盐、稀酸、稀碱的水溶液。部分与脂类结合的蛋白质可溶于乙醇、丙酮和丁醇等有机溶剂中。 1.水溶液提取 稀盐(0.15mol/L)和缓冲溶液对蛋白质溶解度大,稳定性好,是常用的蛋白质提取液.5°C以下操作,防止热变性. 同时加蛋白质水解酶抑制剂-碘乙酸 控制pH在等电点附近. 2.有机溶剂提取 与脂类结合的蛋白质,分子中含有非极性侧链的蛋白质不溶于水、稀盐、稀酸、稀碱的水溶液,但可溶于乙醇、丙酮和丁醇等有机溶剂中。 3.表面活性剂提取 用非离子型表面活性剂可以提取水盐系列无法提取的蛋白质和酶,但随后分离困难,要小心使用. 蛋白质的分离纯化p218 如测单一结构蛋白，则必须分离纯化。 为了研究某一个蛋白质的结构，必须首先将该蛋白质 从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化出来。用于分离蛋白质的最重要特性有大小、电荷、疏水性和对其他分子的亲和性。通常采用多种方法的组合来实现蛋白质的完全纯化 . 纯化方法（见218－226） 1. 沉淀法 2. 色谱法 3. 电泳法 4. 离心法 5. 膜分离法 6. 双水相系统萃取法 1.沉淀法 盐析法、PEG沉淀法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法、热处理沉淀法 （1）盐析法 蛋白质水溶液加入盐的浓度对蛋白质的溶解度有显著影响. 低浓度的盐能增加对蛋白质的溶解度,称为盐溶; 当盐的浓度增加时,蛋白质的溶解