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生物化学研究技术与方法 第一章 第二章 层析分离技术 一、名词解释 1.生化技术：是在生物化学及其相关学科应用的各种技术。主要是指生物体内物质及其代谢产物，特别是生物大分子的分离、检测、制备与改造技术。 2.提取（萃取）：是在一定的条件下，用一定的溶剂处理样品，使欲分离的物质充分释放到溶剂中的过程。又称“抽提”或“萃取”。 3..沉淀分离技术：是通过改变某些条件或加入某种物质，使溶液中某种溶质的溶解度降低，从而从溶液中沉淀析出的技术。 4.盐溶：低盐浓度下蛋白质的溶解度随着盐浓度的升高而增加的现象。 5.盐析作用：盐浓度升高到一定程度后，蛋白质的溶解度随着盐浓度的升高而降低，结果使蛋白质沉淀析出，这种现象即为盐析作用。 6.等电点沉淀法：是利用蛋白质在pI时溶解度最低，以及不同的蛋白质有不同的pI这一特性，对蛋白质进行分离纯化的方法。 7.有机溶剂沉淀法：利用不同蛋白质在不同浓度的有机溶剂中的溶解度不同而使蛋白质分离的方法称为有机溶剂沉淀法。 二、填空 1. 现代生化技术的显著特点：是以三高所著称，即：高技术、高投入、及高利润。 2. 生物大分子主要包括： 蛋白质 、 酶 、 核酸 、 多糖 和 脂类 ，它们是生物体内存在的具有特殊生物学功能的高分子化合物。 3. 生化分离技术主要有　沉淀分离技术　分离、　层析分离技术　分离、　电泳分离技术　分离和　　超离心分离技术　　分离技术。 4. 蛋白质和酶的种类繁多，在提取时应根据其　　存在的部位　　　、分子结构及　溶解性质　　的不同选择不同的提取方法。 5. 影响提取的因素主要有 溶剂 、 溶解度 、 温度 、 pH 和 浓度差 等。 6. 水溶液法提取酶和蛋白质时，要注意控制好　盐浓度、　温度、　pH值　等因素。 7. 沉淀分离技术包括　盐析 沉淀、　等电点　沉淀和　有机溶剂　沉淀等技术。 8. 在分段盐析中，在一定的pH和温度条件下，改变离子强度称为 Ks分段 盐析，而在一定的盐和离子强度条件下，改变温度或pH值称为 β分段 盐析。 9. 实验室进行蛋白质盐析沉淀时应用最多、最广的盐是 硫酸铵 。 10. 在核蛋白提取时，应选用0.14mol/L的氯化钠溶液提取 核糖 核蛋白，而选用1mol/L的氯化钠溶液提取 脱氧核糖 核蛋白。 11. 核酸分离时从pH5沉淀中可分离得到 tRNA 。 12. RNA的提取方法主要有 稀盐溶液 提取和 苯酚水溶液 提取。 13. 苯酚水溶液提取核酸时， 蛋白质 和 DNA 沉淀于 苯酚 层中，而 RNA和 多糖 溶解于 水层 中。 14. 核酸沉淀分离主要有 有机溶剂沉淀法 、 等电点沉淀法 、 钙盐沉淀法 和 选择性溶剂沉淀法 四种方法。 15. 能够选择性地沉淀DNA的试剂是 异丙醇 。 三、问答题 1．进行细胞破碎的方法有哪些：①机械破碎法：是通过机械运动所产生的剪切力的作用使细胞破碎的方法。②物理破碎法：用各种物理因素(温度、压力、超声波)的作用使细胞破碎的方法。③化学破碎法：用化学试剂可使细胞膜结构改变或破坏，改变细胞膜的通透性。④酶学破碎法：通过加入酶或利用细胞本身的酶的作用，使细胞破碎的方法。 2．蛋白质和酶提取、分离的一般原则：①提取、分离方法条件要温和使目的蛋白质和酶的活性和功能不受损害②尽量尽早除去各种杂质、脂类、核酸及毒素。③设法除去变性的和不需要的蛋白质。④设法提高目的蛋白质的含量或生物活性。⑤分离纯化要在缓冲溶液中进行。⑥建立灵敏、特异、精确的检测方法。⑦根据其存在的部位、分子结构及溶解性质的不同选择不同的提取方法。 3．实验室进行蛋白质盐析沉淀时应用最多、最广的是硫酸铵，它的优缺点是什么：优点：①它在水中溶解度大；②其溶解度受温度的影响较小；③价廉易得；④不易引起蛋白质变性；⑤分离效果比其它盐好。缺点：①缓冲能力差；②NH4+离子会干扰蛋白氮的测定。 4．核酸提取要注意的原则：①防止核酸酶的降解: 在提取分离核酸时要降低核酸酶的活性，通常加入抑制剂和去激活剂。②防止化学因素的降解: 避免强酸强碱。③防止物理因素的降解: 核酸大分子、高温、机械作用等均可以破坏核酸分子的完整性，因此核酸提取适于在低温及避免剧烈搅拌等条件下进行。 一、名词解释 1.层析分离技术：是利用混合物中各组分的物理、化学性质（分子的形状和大小、分子的极性、吸附力、分子的亲和力、分子的分配系数等）的不同，使各组分以不同程度分布在两相中，当流动相流过固定相时，各组分以不同的速度移动，而达到分离的技术。 2..吸附层析：是利用吸附剂对不同物质的吸附力不同而使混