色谱法详案解析.doc

教 案（详案） 课程名称： 生物药物分析 课程性质： 专业必修课 适用专业（方向）：生物制药专业 总学时：36学时 使用教材：生物药物分析 开课单位：生命科学与技术学院 授课教师：谭承佳（助教） 授课班级：生物制药05级3班 开课时间：2007-2008学年上 课程 班级 生命科学04级1-2班 学期 2006-2007-1 课时 2学时 教师 上课日期 每周4第3.4节 课程类型 理 论 课程名称 （章、节） 第章 色谱法概述 教学目的、要求 使同学了解 教学重点 教学难点 主要教具 设备材料 投影仪、电脑、常规教学设备。 思考题 1 概念：  2 色谱法的基本原理？ 教 学 过 程 安 排 引入 min 《生物药物分析》授课教案 授 课 内 容 概述： 的 1942年瑞典科学家Tiselins因电泳和吸附分析的研究获诺尔奖金。 50年代英国生物化学家Martin在研究液液分配色谱的基础上建立了气相色谱法并且提出了色谱分离的塔板理论，Martin由于对气相色谱法的贡献获得诺贝尔奖金。 60年代后期出现了高效液相色谱法。 70年代末发展了气相色谱-质谱联用技术、液相色谱-质谱联用技术。 色谱法经历了近百年的发展已经由分离向分离、分析的，色谱法在药物分析领域占有重要地位，已成为我国药物分析论文中使用频率最高的一种分析方法，在质量标准中的应用也迅速增加。（示图） 基于组分通过互不相溶的两相而达到分离：样品溶解在流动相(Mobile Phase)中，从装填在柱子中或涂渍在载体表面的固定相(Stationary Phase)上通过，依据组分与固定相之间的相互作用力的不同，经过充分的运行时间，即被分离。色谱法是一种分离技术，这种分离技术应用于分析化学中，就是色谱分析。 四 色谱法分类 色谱法种类很多，通常按以下几种方式分类。 1．按两相状态分类 在Tswett的实验中，碳酸钙是固定不动的，称为固定相；石油醚是流动的，称为流动相。根据流动相状态，流动相是气体的，称为气相色谱法；流动相是液体的，称为液相色谱法。若流动相为超临界流体，则称为超临界流体色谱法。 根据固定相状态，是活性固体（吸附剂）还是不挥发液体或在操作温度下呈液体（此液体称固定液，它预先固定在一种载体上），气相色谱法又可分为气固色谱法和气液色谱法；同理，液相色谱法也可分为液固色谱和液液色谱法。 2. 按分离原理分类 色谱法中，固定相的性质对分离起着决定性的作用。 根据不同组分在固定液中溶解度的大小而分离的称为分配色谱。气相色谱法中的气液色谱和液相色谱法中的液液色谱均属于分配色谱。 根据不同组分在吸附剂上的吸附和解吸能力的大小而分离的称为吸附色谱。气相色谱法中的气固色谱和液相色谱法中的液固色谱均属于吸附色谱。 3. 按固定相的形式分类 固定相在柱内的称为柱色谱，柱色谱有填充柱色谱和开管柱色谱。固定相填充满玻璃或金属管中的称为填充柱色谱；固定相固定在管内壁的称为开管柱色谱或毛细管柱色谱。 固定相呈平面状的称为平板色谱，平板色谱有纸色谱和薄层色谱。前者以吸附水分的滤纸作固定相，后者以涂敷在玻璃板上的吸附剂作固定相。 4．按固定相材料分类 根据固定相材料的不同进行分类。以离子交换剂为固定相的称为离子交换色谱。以孔径有一定范围的多孔玻璃或多孔高聚物为固定相的称为尺寸排阻色谱。采用化学键合相（即通过化学反应将固定液分子键合于多孔载体，如硅胶上）的称为键合相色谱。 （二）纸色谱法 一 分配色谱原理： 以一种多孔性的物质表面吸附一种具有黏度的有机相液体，该液体在色谱传递过程中始终固定在支持体上，构成色谱分离的固定相。另一互不相溶的溶剂作为流动相进行洗脱。 分配系数：待分离物质在两项中的溶解度之比 比移值：原点到斑点距离与到溶剂前沿的距离之比 二 影响因素： 物质极性、溶剂、PH值、滤纸以及时间、温度、显色条件 三 纸色谱的应用：混合氨基酸的分离鉴别 （三）薄层色谱法 一 薄层色谱的应用 （教师讲授） 二 薄层色谱的基本原理 薄层色谱法是将细粉状的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑胶板或铝板上，成一均匀的薄膜，经点样、展开与显色后，再与适宜的对照物质按同样的方法所得的色谱图作对比，用于药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。 吸附剂 吸附剂的性质： 活性：保留溶质组分的程度 白色、内部多孔、吸附表面、吸附解吸附 常用的吸附剂：硅胶、氧化铝、聚酰胺、纤维素、凝胶 吸附剂的选择： 样品性质：酸碱性、脂溶性、水溶性 吸附剂性质：活性、化学反应性、物理性质 展开剂 展开剂的选择要求： 能溶解待测组分（极性） 能分离待测组分与杂质（选择性） 展开斑点圆整集中、Rf值适中 化学反应性弱 沸点、黏