基于S蛋白检测猪流行性腹泻抗体间接ELISA方法的建立.pdfVIP

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2016-05-08 发布于安徽
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基于S蛋白检测猪流行性腹泻抗体间接ELISA方法的建立.pdf

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河南农业科学，，（）：２０１３４２８１１９１２３　－ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｎａｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ　　　　ｇ　基于蛋白检测猪流行性腹泻抗体Ｓ间接ＥＬＩＳＡ方法的建立邓祖丽颖（，）郑州幼儿师范高等专科学校河南郑州４５００００：（），摘要为建立检测猪流行性腹泻病毒蛋白抗体的间接方法应用方法ＰＥＤＶＳＥＬＩＳＡＲＴＰＣＲ　，（），扩增ＰＥＤＶ河南流行毒株Ｓ基因７９４ｂ片段将其克隆至原核表达载体ＥＴ３２ａ＋构建ｐｐ　，，重组质粒并转化至宿主菌在条件下加入进行诱导表达经ＥＴ３２ａＳＢＬ２１３７ ℃ ＩＰＴＧＳＤＳｐ　，，；分析显示该蛋白以融合蛋白形式高效表达分子量约为分析表ＰＡＧＥ４６．９ｋＤＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ　，。明所表达的重组蛋白具有良好的反应原性以纯化的蛋白为包被抗原建立检测抗体的间ＳＰＥＤ，／，，接ＥＬＩＳＡ方法试验确定抗原最佳包被量为０．０４孔血清最佳稀释度为１∶１００ＨＲＰＩＧｇ　ｇ μ ，。二抗最佳稀释度为１∶２０００阳性判定标准为ＯＤ值０．２４应用该方法对采自河南省