高效液相色谱仪的原理及应用知识解析.ppt

2. 流动相 按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。 * 流动相选择 在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。 也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小) * 1、环境中有机氯农药残留量分析 固定相：薄壳型硅胶(37 ～50?m) 流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm?2.5mm(内径) 检测器：折光示差检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。 第三节 HPLC的应用 * 2、稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。 固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：20%甲醇-水 ～100%甲醇 线性梯度淋洗，2%/min 流 速：1mL/min 柱 温：50 oC 柱 压：70 ?104 Pa 检测器：紫外检测器 * 高效液相色谱仪的原理及应用 * 一、高效液相色谱法的定义和分类 流动相是液体的色谱称为液相色谱（LC）。 在液相色谱中，采用颗粒十分细的高效固定相，并采用高压泵输送流动相，全部工作通过仪器完成，这种色谱称为高效液相色谱（HPLC） 。 第一节 高效液相色谱法原理 * 一、高效液相色谱法的定义和分类 液相色谱：平板色谱和柱色谱。 液相色谱：分配色谱、液固色谱、离子交换色谱、尺寸排阻色谱。 气相色谱：挥发性物质，不能用于热不稳定物质分析。 液相色谱：可分析各种物质，热不稳定物质，但流动相有毒，运行操作比GC难。能用GC就用GC。 * 二、液相色谱中常用术语和参数 只针对HPLC特有的，其余术语与第三章同。 粒间体积（V0）：色谱柱填充剂颗粒间隙中流动相所占有的体积。 孔体积（Vp） ：色谱柱中多孔填充剂的所有孔洞中流动相所占有的体积。 * 二、液相色谱中常用术语和参数 柱外体积（Vext）：从进样系统到检测器之间色谱柱以外的液路部分中流动相所占有的体积。 液体总体积（Vtot） ：粒间体积、孔体积和柱外体积之和。 淋洗体积（V） ：从进样开始计算的通过色谱柱的实际淋洗体积。 * 三、反相高效液相色谱 由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系。其代表性的固定相是十八烷基键合硅胶(ODS柱），代表性的流动相是甲醇和乙腈。是当今液相色谱的最主要分离模式。 溶质在填料表面的烃类和流动相之间进行分配。 溶质在吸附于填料表面烃类上的“改良固定相”和流动相之间进行分配 溶质被吸附于填料表面烃类分子上，类似吸附色谱。 * 四、正相高效液相色谱 是由极性固定相和非极性（或弱极性）流动相所组成的HPLC体系。其代表性的固定相是改性硅胶、氰基柱等，代表性的流动相是正己烷。吸附色谱也属正相HPLC。 溶剂洗脱强度近似地随溶剂的介电常数增加而增大，洗脱能力越弱，溶质在柱上保留时间越长。 * 第二节 高效液相色谱仪的组成 Agilent 1100 * 1.输液系统 2.进样系统 3.分离系统 4.检测系统 5.数据处理 系统 一 高效液相色谱仪系统 高压泵 流动相溶剂 废液 色谱柱 进样口 检测器 * 1、输液系统 贮液装置 脱气装置 高压输液泵 梯度淋洗系统 输液系统的功能: 1.提供足够的驱动力使流动相通过填充柱 2.使流动相流量精确和稳定 3.使流动相组成精确 * 分析用高效液相色谱的流动相贮罐，常用1L的锥形瓶加一个电磁搅拌器，在连接到泵入口处的管线上要加一个过滤器。 (1) 贮液装置 * (2) 脱气装置 用于脱去流动相中的溶解气体，流动相先经过脱气装置再输送到色谱柱。 脱气机、超声脱气、真空脱气等。 * (3) 高压输液泵 主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很