高产二羟基丙酮重组菌株的构建.pdfVIP

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生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2015, 31 8 :174-179 高产二羟基丙酮重组菌株的构建 1,2 2 2 许晓菁   赵琼  王祥河 (1. 天津市产品质量监督检测技术研究院,天津 300380 ;2. 天津市工业微生物研究所,天津 300462) 摘 要 : 旨在构建一株过量表达编码膜系甘油脱氢酶的sldAB 基因的重组菌株,以提高二羟基丙酮产量。以氧化葡萄糖 酸杆菌ATCC621H 的基因组DNA 为模板,运用PCR 方法扩增得到基因sldAB ,并连接到pBBR1MCS-2 质粒上,构建表达载体 pBBR1MCS-2-sldAB。通过电转化将载体pBBR1MCS-2-sldAB 转化进入氧化葡萄糖酸杆菌ATCC621H 内,得到重组菌株GOX205。 结果显示,重组菌株构建成功,其甘油脱氢酶的酶活力较之于出发菌株提高了26%。在甘油初始浓度100 g/L 的甘油发酵培养基中, 较之于出发菌株,GOX205 的生长状况良好,发酵52 h 时DHA 浓度达到94.1 g/L,较之于出发菌株提高了 19.7%,甘油残量降低 了15.1 g/L。 关键词 : 1,3- 二羟基丙酮 ;重组菌株 ;甘油 ;过量表达 DOI :10.13560/ki.biotech.bull.1985.2015.08.025 - Construction of a Recombinant Strain Producing High yield Dihydroxyacetone 1,2 1 1 Xu Xiaojing Zhao Qiong Wang Xianghe (1. Industrial Microbe Research Institute of Tianjin ,Tianjin 300462 ;2. Tianjin Product Quality Inspection Technology Research Institute , Tianjin 300380 ) Abstract : This work aims to construct a recombinant strain containing gene sldAB over-expressing membrane-bound glycerol dehydrogenase for raising the yield of dihydroxyacetone(DHA). Firstly, using genomic DNA of Gluconobacter oxydans ATCC621H as a template, sldAB amplified by PCR was ligated to the plasmid pBBR1MCS-2 and the expression vector pBBR1MCS-2-sldAB was constructed ; subsequently the plasmid pBBR1MCS-2-sldAB was transformed into the G. oxydans ATCC621H by electrotransfer, and the recombin

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