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　　　　　　 本科毕业论文(设计) 题 目： 药材甲HSP70和HSP90贵阳学院本科毕业论文（设计） 诚信责任书 本人郑重声明：本人所呈交的毕业论文（设计），是在指导老师的指导下独立进行研究所完成。毕业论文（设计）中凡引用他人已经发表或未发表的成果、数据、观点等，均已明确注明出处。 特此声明。 论文（设计）作者签名： 日 期： HSP70和HSP90RT-PCR技术克隆获得了2条HSP基因的全长序列，并对其生物信息学进行了分析。研究结果将为药材甲热激蛋白基因功能研究提供基础。 二、基本要求 1、实验前需查阅关于的相关文献，知道国内外研究进展、研究方法、数据处理以及结果分析等。 2、熟悉掌握高压灭菌器、移液器、电泳仪、凝胶成像仪、常温离心机等仪器的使用方法。 3、熟悉药材甲总RNA的提取方法、的方法。 4、按计划完成各阶段的研究工作。 5、通过对药材甲的得出相关的结论。 6、查阅相关文献，按相关的规范与写作要求完成论文写作。 [1] 王建义 热激蛋白的研究进展[J] 山西林业科技, 2008,（1）: 26-28. []王欢蝶蛹金小蜂热激蛋白家族基因表达与热保护功能J]. 昆虫学报2012,55(8): 903-905. [3]杨丽红柑橘全爪螨Panonychus citri(McGregor)对热胁迫的响应机制研究D]. 重庆西南大学2011: 10-12. [4]余昊万方浩B型烟粉虱和温室白粉虱热激蛋白90基因(HSP90)的全长cDNA克隆与系统发育分析[J]昆虫学报2009, 52（4）364-366. [5]崔旭红谢明万方浩高温胁迫下B型烟粉虱热激蛋白基因HSP70表达量的变化J]. 昆虫学报2007, 50(11): 1087-1091. [6]李灿中药材储藏物害虫优势种药材甲形态及生活史J]. 植物保护2007, 33: 123-124. 完成期限： 指导教师签章: 专业负责人签章： 目 录 摘 要 1 Abstract 2 第一章 文献综述 3 1. 热激蛋白概述 3 1.1 热激蛋白的分类及主要功能 3 1.2 HSP基因的表达调控 4 2. 热激蛋白在昆虫中的研究进展 4 2.1 热激蛋白的诱导表达能提高昆虫的耐热性 5 2.2 热激蛋白的表达能使昆虫快速获得耐热性 5 2.3 热激蛋白的表达量与昆虫耐热能力正相关 6 3. 药材甲研究概述 6 4. 本研究目的和意义 7 第二章 药材甲HSP70和HSP90基因的克隆及序列分析 8 1. 材料与方法 8 1. 1 供试虫源 8 1.2 试剂与仪器 8 1.3 总RNA提取 9 1.4 基因组DNA的去除 9 1.5 反转录合成第一条cDNA链 10 1.6 PCR引物设计 10 1.7 PCR扩增 10 1.8 PCR产物回收、连接、转化、测序 11 1.9 药材甲HSP基因的序列分析 11 2 结果与分析 11 2.1 药材甲HSP70和HSP90基因的克隆 11 2.2 药材甲HSP90和HSP70基因系统发育分析 15 第三章 小结与讨论 16 致 谢 16 参考文献 18  摘要：【目的本研究旨以探讨热激蛋白的功能以及药材甲对环境适应的分子机理方法本研究采用RT-PCR技术克隆了药材甲热激蛋白HSP70和HSP90基因的全长，利用各种生物信息方法分析其基因组和蛋白质的特征结果获得了HSP70和HSP90基因的cDNA全长序列，分别命名为SpHSP70和SpHSP90。SpHSP70基因的开放阅读框长度为1950 bp，编码650个氨基酸。通过ProtParam软件在线分析，SpHSP70基因推导的蛋白质分子式为C3121H5003N863O992S21，理论分子量为71.16 kDa，等电点为5.36，氨基酸序列中含有HSP70家族的3个保守基序和细胞质型HSP70 C-端基序（EEVD），系统进化关系分析表明它与多种昆虫的HSP70序列有较高的同源性。SpHSP90基因的开放阅读框长度2169 bp，编码723个氨基酸。通过ProtParam软件在线分析，SpHSP90基因推导的蛋白质分子式为C3650H5816N968O1161S27，理论分子量为82.70 kDa，等电点为5.01，氨基酸序列中含有HSP90家族的5个保守基序，以及细胞质型HSP90 C-端基序（MEEVD），结构预测表明SpHSP90具有HSP90家族的典型结构特征，系统进化关系分析表明它与多种昆虫的HSP90序列有较高的同源性。结论药材甲体内的SpHSP70和SpHSP90可以响应温度的诱导，它可能在药材甲温度胁迫适应过程中起到极其重要的作用。 Abstract 【】The purpose of th