光系统Ⅱ大量捕光色素蛋白复合体(LHCⅡb)结构和功能关系的定点突变的研究.pdfVIP

摘要 摘 要 体外定点突变技术可以对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺 失或者插入，从而改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构，因而成为研究蛋 白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具。对突变基因的表达产物进行 研究有助于我们了解蛋白质结构和功能的关系，探讨蛋白质的结构／结构 域。 植物体光系统II的大量捕光色素蛋白复合体(LHCIIb)具有多种功能， 在自然界不同日光光强下分别执行捕获、传递光能或将过度激发能非光化 学耗散的功能。最新的近原子分辨率LHCIIb晶体结构揭示出在LHCIIb穿膜 螺旋B／C之间的环区具有复杂的超二级结构，其中一个新发现就是在此环 区靠近穿膜螺旋C的区域中存在一个反平行股的结构，其功能不明。为了 研究此反平行链对于LHCIIb复合体在结构和功能上的意义，我们将了这一 Gly，并研究了这三个定点突变对LHCIIb结构和功能上的影响。结果如下： l，CD光谱揭示出该反平行链对于调节新黄质及其附近色素群的构象十分 重要。虽然这三个突变只造成很少的新黄质丢失(V1 0．1 19F,O．09；S123G7； and H120L，0．26)，但是却使色素构象发生了巨大变化。2，将S123突变成 G导致复合物对光破坏更加敏感并且更易于聚集，在介质酸化后复合物的 摘要 荧光淬灭更加显著。这些结果说明这段反平行链对于调节LHCIIb色素构象 以及控$1JLHCIIb聚集体形成和叶绿素荧光产量具有重要作用。 以结构为基础的计算设计方法与定向进化相结合是蛋白质工程的一个 发展方向。最近，通过计算设计已成功地向蛋白质引入了新的催化活性、 提高了蛋白质的稳定性、设计了酶的催化活性位点、改变了酶的底物特异 性等．目前还没有见到有研究定向地，以理性方式对LHCIIb进行蛋白质设 计。我们使用蛋白质的计算机辅助设计工具一一RosettaDesign鉴定出一个 可以显著提高LHCIIb光、热稳定性的定点突变1124L，并且突变体的的结 构和功能与野生型无异。这是首次将计算机辅助设计应用于提高LHCIIb稳 定性的研究。 关键词：定点突变；LHCIIb；新黄质；非光化学淬灭；蛋白质设计 II curet-up．Iyll I．．S．，tnulr．drly-，oflnTtIhIlet．r--e-zlIa_，t，i．on．。sfih．．i．p．hoafl?tvhees—stru—ct——u—r一一e——一a一一n一一dtlng fun黑：。lII…腑JvI 11(LHt=llD of photosystem xelpmo～yb)LT……鬯。甜h∥u ．nesisneSIS J-a a／bc．． au‘·-J mutage directed etisJ∥sisylana 洫 ．叠 S 埘 “雠nfm 谛 沁 雌舢 啪¨=詈 b弱 h 枷．董 U协 硪幽 一 叭 一