异构体方法学研究.ppt

* 1.柱温改变：室温、标准温度、+2-5℃。 （注意色谱柱最高耐受温度）， 2.流速改变：± 0.1ml/min 3.流动相比例变化±5%（低比例溶剂） 4.波长改变：±2nm或者（±5nm） 异构体-原料-耐用性 * * 师傅领进门，修行在个人 *  *  异构体方法学研究 *  手性的概念：一种镜像反射的对称性 Mirror Image Mirror Image * 手性分子：组成相同但空间结构上互成镜像的分子，称之为对映异构体。 分子结构中含有不对称碳原子是最常见的手性结构。 根据对偏振光的作用不同可分为R、S体，两者的等量混合物称之为消旋体。 * 在未研究清楚两种单一对映体之间的生物学差异时，以消旋体给药往往会影响药物质量，甚至会严重损害人体健康。 “反应停”(Thalidomide)作为人工合成药，当时投入使用时是两种对映体的混合物。 * 手性药物的现状 临床药物 1850种 天然和半合成药物 523种 化学合成药物 1327种 非手性6种 手性517种 非手性799种 手性528种 以单个对映体给药509种 以外消旋体给药8种 以单个对映体给药61种 以外消旋体给药467种 * 常用手性高效液相色谱法 手性固定相法-手性色谱柱 手性流动相添加法-手性试剂-左氧氟沙星 手性衍生化试剂法 * 对映体除了偏振光的偏转方向不同外，其它理化性质完全相同，因而分离难度大。 手性色谱拆分方法：创造（或引入）手性环境，构造非对映异构体，使药物对映体间呈现理化特性的差异，从而实现药物对映体的色谱分离。 * 含多个手性碳原子化合物，分子中所含手性碳越多，对映异构体的数目越多。 对映体 对映体 非对映异构体 * 手性高效液相色谱法（Chiral HPLC) 手性衍生化试剂法（CDR）（分析物） 手性固定相法（CSP） （固定相） 手性流动相添加法（CMP）（流动相） * 手性固定相法（CSP） 原理：将手性试剂化学键合到固定相上与药物对映体反应形成暂时的非对映体对复合物，这种固定相称作CSP。 在CSP表面所形成的非对映体对，可根据其稳定常数不同而获得分离。（三点结合模型） * 手性固定相 吸附型 电荷转移型 蛋白质类 环糊精类 多糖衍生物 反相、防有机溶剂 正相、防水 正、反相均可 * 纤维素的单体D-葡萄糖以β-1,4-糖苷键相连而成的线型聚合物，将羟基衍生化 成酯以增强手性识别能力。 由于水和卤代烃都能溶解纤维素及其衍生物，故流动相大都为正相色谱系统，使用极性较小的非卤代烃有机溶剂。 多糖及其衍生物类手性固定相 * 最常用的多糖型手性色谱柱 （Daicel ，大赛璐 ） 淀粉柱：Chiralpak AD、Chiralpak AS、 纤维素柱：Chiralcel OD、Chiralcel OJ * CHIRALPAK AD系列 直链淀粉-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]衍生物；用于分离胺类、酯类化合物 CHIRALPAK AS系列 直链淀粉-三[(S)-α-甲苯基氨基甲酸酯]衍生物；适合于分离β-内酰胺类、环氧化物、酸类、杂环类化合物化合物。 CHIRALCEL OD系列 纤维素-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]衍生物；适用于分离β-受体阻滞剂、具有相同功能的化合物、类固醇类化合物，如：阿普罗尔、美托洛尔、氧烯洛尔。（芳氧丙醇胺类） CHIRALCEL OJ系列 纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]衍生物； 被用于分离布洛芬、氯胺酮等药物，以及在手性中心含有一个大的取代基的化合物 * * 手性柱通用性差 正相、反相 不同手性柱使用注意事项不一致，应用时一定要找负责人或者供货商要说明书 手性柱使用说明 * * 方法学验证内容： 准确度（回收率） 精密度 重复性 中间精密度 专属性 定量限和检测限 线性 范围 耐用性 * 制剂-异构体研究* 制剂生产工艺中或者辅料长期作用下产生异构体 因此制剂也要求对异构体进行研究 0月、影响因素30天、加速6月、长期12月、长期24月 * 1.以异构体限度浓度（常0.1%）为100%，与原料混合制备成混合溶液。原料浓度为供试溶液浓度不变。 制备几个点： 定量限浓度、10%（20%)