P2X7受体短肽单克隆抗体的制备及其鉴定.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2012年第12期 P2X7 受体短肽单克隆抗体的制备及鉴定 1，2 1 1 谭超   韩莉  神谢静 1 2 （ 三峡大学医学院，宜昌 443002 ； 三峡大学第一临床医学院 宜昌市中心人民医院检验科，宜昌 443002） 摘 要 ： 旨在制备与鉴定鼠抗P2X7 受体的蛋白单克隆抗体。以人P2X7 受体的胞外段制备短肽作为抗原，皮下注射免疫 Balb/c 小鼠。分离小鼠脾脏B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合并培养，挑选阳性杂交瘤细胞，扩大培养，制备和鉴定P2X7 其生物学效 应。结果显示，获得 1 株稳定分泌抗人P2X7 受体的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所分泌的单抗类型重链为IgG1，轻链为κ ；该株 杂交瘤细胞腹水效价为1 ∶6.4 ×104 ；传30 代及液氮中保存6 个月，抗体效价稳定 ；Western blotting 检测证明该单抗与人细胞表面 的P2X7 受体蛋白特异地结合。所制备的抗人P2X7 受体的单克隆抗体具有高度的特异性及稳定性，为针对P2X7 受体为靶点的抗 体药物的开发应用、疾病的辅助诊断奠定了基础。 关键词 ： P2X7 受体 短肽 单克隆抗体 The Preparation and Identification of P2X7 Short Peptide Receptor Monoclonal Antibody 1，2 1 1 Tan Chao Han Li Shen Xiejing 1 2 （Medical Science College of China Three Gorges University ，Yichang 443002 ；Dep artment of Internal Medicine Yichang Central Peop le ’s Hosp ital Laboratory Medicine ，the First Clinical Medical College of China Three Gorges University ，Yichang 443002 ） Abstract:  The aim was to prepare and identify the monoclonal antibodies of the P2X7 receptor. Our method was to use the extracellular fragment of human beings ’ P2X7 receptor to produce the short peptide as an antigen to immunize mouse for three times. Then B lymphocytes were isolated from the mouse spleen, and then mixed with myeloma cells and cultured. The positive hybridoma clones were selected and widely