永久性双侧颈总动脉结扎大鼠海马AMPK-mTOR的时向变化及其和神经功能评分关系.pdfVIP

摘要 摘要 目的：建立大鼠2-VO法脑缺血模型，探讨急性缺血性脑损伤中单磷酸腺 苷活化蛋白激酶(AMP．activatedkinase，AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶 potein 蛋白(mammalian target 评分(NDS)的相关性。 方法：选取健康清洁级雌性SD大鼠24只，随机分为假手术组(A组)、 脑缺血4小时组(B组)、脑缺血8小时组(C组)、脑缺血24小时组(D组)， 每组6只大鼠。参照大鼠2-VO法并改良，建立大脑急性缺血模型，A组麻醉 后仅手术暴露双侧颈总动脉并游离出迷走交感神经链，不做双侧动脉结扎和离 断，缝合切口待苏醒后参照改良的神经功能缺陷评分(NDS)法从意识、基本 反射、感觉、运动、行为等方面进行评分，之后断头处死取双侧海马；B、C、 D组均麻醉后实施手术暴露双侧颈总动脉，游离出双侧迷走交感神经链，结扎 双侧颈总动脉近心端与离心端，并于结扎段中点剪断颈总动脉，分别于术后4h (B组)、8h(C组)、24h(D组)断头处死后取双侧海马组织，各组处死前 15min均先进行NDS评分；所有大鼠模型采用左侧海马行WesternBlot检测 马行HE染色观察细胞形态学变化。 结果：(1)NDS评分的变化：与A相比，B组和C组的NDS评分均下降， 但其值随时间点逐渐增高，差异有显著统计学意义(p0．01)；D组NDS评 mTOR的活性变化：p-AMPK／AMPK的比值在脑组织缺血后升高，与A组相比， B组的比值最高，有显著统计学意义(pO．01)，随后C组逐渐减弱(pO．01)； 的比值在脑组织缺血后均明显下降，与A组相比，B组比值最低，C组及D组 其比值逐渐增高，D组的比值最高，但仍低于A组，差异均有显著统计学意义 在脑组织缺血后的表达明显减弱，与A组对比，B组最低(p0．01)，随缺 血时间延长其表达呈递增趋势；D组最高，与A组相比差异无统计学意义(p 摘要 O．0fi)。p．4E．BPl的表达在脑缺血后各时间点较假手术组均明显减弱，但随 缺血时间延长而逐渐增强，各组与A组相比，差异具均有显著统计学意义 (pO．01)。 通过绘制散点图并行相关性分析显示：海马组织AMPK表达与mTOR表 mTOR的表达与NDS评分呈正相关(r0．864，p0．01)。 结论：脑缺血后大鼠海马组织中AMP列mTOR信号通路被激活，且呈相互 拮抗的时向关系，其可通过改变下游S6K和4E．BPl的磷酸化参与蛋白质合成 的调控，AMPK的激活不利于早期神经系统功能的恢复；AMPK／mTOR信号 通路的表达改变可能影响缺血后脑损伤的发生发展，可能成为急性缺血性脑损 伤治疗的新靶点。 关键词：脑；缺血性脑损伤；AMPK；mTOR III Abstract ABSTRACT withcerebral of2-VOinrats establishthemodel ischemia， Obiective：To trend ofAMP-activated themerelevancebetweenvariability potein investigate of of kinase(AMPK)andmammalian hippocampus targetrapamycin(mTOR)in