胸苷酸合成酶基因多态性和胰腺癌化疗敏感性的关系.pdf

胸苷酸合成酶基因多态性与胰腺癌化疗敏感性的关系 中文摘要 研究背景 胰腺癌恶性程度高，进展快，目前是西方国家第4位致死肿瘤，在我国的发病率 也逐年上升。85％的胰腺癌患者在就诊时己丧失手术机会，其预后差，中位生存时间 不足6个月，5年生存率为O．4—5％n3。以化疗为核心的辅助治疗成为胰腺癌治疗的关键， 目前在胰腺癌术后辅助化疗方面5一FU与健择是主要的选择药物，尽管近年来新的化疗 药和改进的联合化疗方案不断推出，但化疗效果并不理想，而化疗个体化可能是提高 临床疗效的有效途径之一。化疗个体化治疗首先要解决的是肿瘤药物敏感性的问题， 近年来随着对人类个体基因差异的深入理解，发现基因多态性与肿瘤化疗密切相关， 胸苷酸合成酶(Thymidylate 酶乜1，目前研究表明TS基因存在多态性，而不同基因型其表达可能存在差异，从而影响 肿瘤患者的临床疗效，因此目前TS基因多态性与化疗疗效的相互关系引起了越来越多 学者的重视。 culture 胶原凝胶微滴肿瘤药敏检测技术(collagengeldroplet drug—sensitivitytest，CD—DST)是一种新的肿瘤体外药敏检测技术嘲，既往研究选 用的胰腺癌体外药物敏感性检测多为体外二维单层培养的细胞模型，但是由于人体内 的胰腺癌组织是一个三维细胞群体，肿瘤本身作为一个整体而具有与其单个肿瘤细胞 不同的特性，肿瘤细胞之间不但相互作用和影响而且肿瘤细胞受到所处的微环境的影 响，而体外二维单层培养的细胞模型不能很好的模拟体内环境，CD—DST技术使细胞在 凝固的鼠尾I型胶原里生长，细胞分裂成细胞团，肿瘤细胞生长状态更加接近生理， 从而使药敏结果更加真实可信。 研究目的 拟通过对多株胰腺癌细胞株、临床胰腺癌患者外周血淋巴细胞、患者术后原代培 养的胰腺癌细胞、病理组织及接受5一FU化疗患者疗效随访等多方面研究，分析胸苷酸 合成酶(Thymidylate 同基因型胰腺癌细胞对5一FU化疗效果的差异，探索可靠的胰腺癌化疗预测指标，从而 为胰腺癌的个体化治疗提供新途径。 研究方法 enhancer 提取胰腺癌患者外周血及7株人胰腺癌细胞DNA后，TS基因增强子区(TS 因分型。使用rea卜timePCR检测人胰腺癌细胞株中不同基因型细胞TSmRNA表达差 异，使用western 腺癌细胞对5一FU的化疗敏感性，临床胰腺癌标本的体外药敏检测通过鼠尾胶原建立以 三维培养为平台的胶原凝胶微滴肿瘤药敏检测技术(CD—DST)检测。胰腺癌患者癌组 织TS蛋白表达检测使用免疫组化法并且对于接受5一FU化疗患者进行随访。数据统计 应用SPSS11．0软件对正态分布的计量资料进行单因素方差分析，患者生存率评估使 ． 用kaplan—Meier分析，当p值小于0．05认为具有显著的统计学差异。 结果 enhancer 1．TS基因多态性检测结果：发现TS基因增强子区(TS 28bp串联重复序列多态性，28 SU86．86： 3R／3R：PANC—l与COL0357。 3R／3R为29．0％(9例)。 因细胞TSmRNA表达高于其它基因型，但差异无统计学意义(PO．05)。 4．Western 0．561±O．056与1．393±0．374，差异有统计学意义(PO．05)。 显低于其他组，差异均有统计学意义(P0．05)。 6．细胞凋亡检测：通过AnnexinV—FITC／PI检测细胞凋亡结果发现不同基因型细胞加 及2R／2R(ASPC一1)基因型细胞，差异有统计学意义(P0．05)。 ．5． 型，差异均有统计学意义(PO．05)。 8．免疫组化结果显示：TS蛋白表达水平与患者的年龄，性别，手术切缘，肿瘤大小