根癌农杆菌介导的赭曲霉遗传转化体系的建立.pdfVIP

根癌农杆菌介导的赭曲霉遗传转化体系的建立.pdf

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生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期 2014 6 根癌农杆菌介导的赭 曲霉遗传转化体系的建立  崔倩  李洁  刘晓光 (天津市工业微生物重点实验室 工业发酵微生物教育部重点实验室 天津科技大学生物工程学院 天津 300457) 摘 要 : 赭曲霉在工业上用于甾体C-11α羟基化。为了对现有赭曲霉生产菌株进行遗传改造,以农杆菌LBA4404 作为侵染 菌株,以赭曲霉 (TCCC4 1060 )作为受体菌株,以潮霉素B 基因作为筛选标记,成功建立了根癌农杆菌介导的赭曲霉遗传转化体 系并对其转化效率的主要影响因素,如农杆菌浓度、孢子浓度、共培养时间和温度等进行了分析。在最佳条件下,转化效率可以 达到57 个转化子/ 108 个分生孢子。随机挑选的8 个阳性转化子10 代连续培养结果表明所获得的转化子能稳定遗传。该遗传转化 体系的建立为赭曲霉菌株的定向遗传改造提供了重要的操作平台。 关键词 : 赭曲霉 根癌农杆菌 转化体系 - Establishment of Agrobacterium tumefaciens mediated Transformation System of Aspergillus ochraceus Cui Qian Li Jie Liu Xiaoguang (Tianj inn Key Laboratory of Industrial Microbiology ,Key Laboratory of Industrial Fermentation Microbiology Ministry of Education ,the College of Biotechnology ,Tianj in University of Science & Technology ,Tianj in 300457 ) Filamentous fungus TCCC4 1060 is an industrial strain used for microbial steroid C11-α hydroxylation. Abstract:  Aspergillus ochraceus In order to create genetic tools for the transformation system of was established using A. ochraceus, A. ochraceus Agrobacterium tumefaciens- mediated system (ATMT ). A. tumefaciens LBA4404 was used as the infective strain and hygromycin B gene as the selection marker. The major factors affecting the transformation efficiency including the concentrations of cell a

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