海参溶菌酶基因在枯草芽孢杆菌WB600中的整合及其表达.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期 2014 4 海参溶菌酶基因在枯草芽孢杆菌 WB600 中的 整合及表达 李丹  李成  孙璐  邹丹  刘志文  丛丽娜 （大连工业大学生物工程学院，大连 116034） 摘 要 ： 采用枯草芽孢杆菌WB600（ WB600 ）在体外表达海刺参溶菌酶（ lysozyme ，SjLys ）蛋白。 Bacillus subtilis Stichopus japonicus 通过构建克隆质粒pMD18-P43-SjLys ，将B. subtilis 自身强启动子P43 序列和已分离得到的SjLys 基因（GenBank 登录号EF036468 ） 连接 （P43-SjLys ）。经BamH I/EcoR I 酶切，将P43-SjLys 片段连接到B. subtilis 整合载体pDG1730 上，构建整合重组质粒pDG-P43- SjLys。经 I 酶切处理，线性化的pDG-P43-SjLys 质粒转化 WB600 细胞。P43-SjLys 片段通过同源双交换重组整合到 Xho B. subtilis B. subtilis WB600 染色体上，成功得到具有稳定遗传的基因工程菌B. subtilis WB600/P43-SjLys。经SDS和抑菌试验分析表明， 培养60 h 后， WB600/P43-SjLys 能够表达可溶的，对常见的海洋细菌溶壁微球菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌活性 B. subtilis 的SjLys 蛋白。首次在B. subtilis 表达系统中得到可溶且具有酶活功能的SjLys 蛋白，为SjLys 的生产提出了一种具有可行性的和潜 力的新方法。 关键词 ： 海参溶菌酶 枯草芽孢杆菌 启动子P43 同源重组 整合表达 Integrative Expression of Stichopus japonicus Lysozyme Gene in Bacillus subtilis Li Dan Li Cheng Sun Lu Zou Dan Liu Zhiwen Cong Lina （School of Biology Engineering ，Dalian Polytechnic University ，Dalian 116034 ） Abstract:  In this study, we cloned promoter P43 of B. subtilis in the front of Lysozyme from Stichopus japonicus （SjLys ） gene by constructing the recombinant plasmid pMD18-P43-SjLys. Then we obtained the integration pl