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郑州大学2006届硕士研究生论文NRAGE基因在胃癌组织中的表达及其与凋亡的关系 NRAGE基因在胃癌组织中的表达及其与凋亡的关系 研究生 张占薪 导师 丁一 张钦宪 郑州大学医学院组胚教研室 河南郑州450052 摘 要 肿瘤的发生、发展是多种因素长期共同作用的结果。在分子水平上，肿瘤的 发生常涉及多基因参与，是一个多因素、多阶段的复杂的生物学过程，通常被认 为是由于细胞原癌基因的激括或抑癌基因的失活，导致增殖过度、分化不足。但 是，越来越多的研究发现，肿瘤的发生不仅与肿瘤细胞的生长速度有关，而且与 其死亡速度也有关，细胞凋亡(ApoptosisAP)也是肿瘤发生发展的一个重要因素。 因此，肿瘤不仅是增殖和分化异常的疾病，也是凋亡异常的疾病。目前胃癌仍是 的新成员。定位于xpll．23的染色体，编码蛋白质有778个氨基酸，分子量是 86kDa。研究显示NRAGE基因有明显的促凋亡的作用，是潜在的抑癌基因。有 关NRAGE基因在胃癌组织中的表达及其与凋亡的关系，国内外尚未见到报道。 本实验用已知质粒pGBKT7，采用酶切、凝胶电泳回收的方法，获得N】RAGE 基因的目的片段，采用随机引物法标记cDNA探针。用原位杂交方法检测NRAGE 基因在胃癌组织、癌旁组织和正常胃黏膜组织中的表达状况，用TUNEL、法检测 组织切片中的凋亡细胞。进一步探讨NRAGE基因对胃癌细胞凋亡的作用以及与 胃癌发生、发展的关系。 郑州大学2006届硕士研究生论文 NRAGE摹因在胃癌组织中的表达及其与凋亡的关系 材料与方法 1．标本收集：收集郑州大学第一附属医院及商丘市第一人民医院2004年10月～ 2005年7月年胃癌手术切除的新鲜标本39例，其中有36例胃癌组织，16例胃 癌旁组织(见有异常增生细胞或肠上皮化生细胞)，11例正常胃粘膜(取自胃癌手 术切缘的正常组织)。所有标本均经4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，将蜡块连续切 取五张和m厚的切片。经HE染色，组织病理学明确诊断。其中男27例，女9 例，年龄33～82岁，(60．4士3．4)岁。所有病例术前均未经化疗、放疗和其它治 疗。 2．cDNA探针制备：质粒pGBK研由南京大学惠赠。制备感受态细菌，把已知质 粒pGBKT7转染感受态细菌，提取纯化质粒，送生物公司测序鉴定目的基因。 酶切、凝胶回收，获得NRAGE基因的目的片段，用随机物法标记地高辛cDNA 探针，检测探针灵敏度。 3．用原位杂交的方法检测36例胃癌组织、16例癌旁组织和11例正常胃黏膜组 织中N】良AGE基因mRNA的表达状况，并观察与临床病理特征的相关性。 4．应用11JNEL法对组织切片中的凋亡细胞进行原位检测，并探讨nmAGE基因 表达与胃癌细胞凋亡的关系。 结果 1．地高辛随机引物法标记的cDNA探针灵敏度达1pg，ul，符合实验要求。(图4)。 2．NRAGE基因mRNA的阳性表达为细胞浆内棕黄色颗粒，阳性表达主要局限 于胃粘膜的浅表部分。在正常胃粘膜组织中NRAGE基因m鼢渔的表达较胃癌 组织和癌旁组织中的表达明显升高(P0．05)。 3．胃癌组织中NRAGE mRNA的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、部位及 肿瘤的分化程度无相关性(P0．05)，与胃癌的浸润深度、淋巴转移、临床分期 密切相关(PO．05)。 4．TUNEI滦色阳性反应物质呈棕黄色，位于细胞核内，在胃癌组织及癌旁组织 中，NRAGE基因表达与细胞凋亡指数里正相关。 II 郑州大学2006届硕士研究生论文 NRAGE基因在胃癌组织中的表达及其与凋亡的关系 结论 癌的发生可能与该基因的低表达有关。 2．NR AGE基因mRNA的表达降低与胃癌临床病理分期、浸润及转移密切相 (PO．05)，提示NRAGE基因可能在胃癌的浸润及转移过程中起抑制作用。 3．NRAGE基因的表达与细胞凋亡指数呈正相关，提示NRAGE基因有促进胃 癌细胞凋亡的作用。 关键词：NRAGE基因； 胃癌； cDNA探针；