食品中大肠菌群的检测摘要.ppt

大肠菌群MPN记数法 革兰氏染色 * * 大肠菌群是指在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。 大肠菌群主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。 显微镜下的大肠菌群 大肠杆菌的检测 大肠杆菌的生物学特性 大肠埃希氏菌习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属。 大肠杆菌为人和动物肠道中的常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道外感染。 食品中大肠菌群的测定 一、实验材料 1、设备和材料 温箱、水浴锅、天平、显微镜、均质器或乳钵、温度计、平皿、试管、发酵管、吸管、载玻片、接种针 2、培养基及试剂 乳糖—胆盐发酵管、乳糖发酵管、蛋白胨水、革兰氏染色液 三、实验方法与步骤 1、采样及稀释 ①固体和半固体样品：称取检样25g，放于盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯，以8000r/min～1000r/min的速度处理1-2min，或放入盛有225mL磷酸盐缓冲溶液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1-2min，做成1：10的样品匀液。 ②液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品置盛有225ml磷酸盐缓冲溶液或生理盐水的无菌锥形瓶充分混匀，制成1:10的样品匀液。 ③样品匀液的PH应在6.5-7.5，必要时分别用1mol/LNaOH溶液或1mol/LHOI溶液调节。 ④用1ml无菌吸管或微量移液管吸取1:10样品匀液1ml沿管壁缓缓注入9ml磷酸盐缓冲溶液或生理盐水的无菌试管中，振荡试管，使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。 ⑤根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10倍递增系列样品匀液。 2. 初发酵试验：每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种3 管月桂基硫酸盐胰蛋白肉汤，每管接种1ml，如未产气则继续培养至（48±2）h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。 3.复发酵试验 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤管汤，产气者，计为大肠菌群阳性管。 在上述的选择性培养基上，挑取可疑大肠菌群1~2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置（36±1）0C的温箱内培养（24±2）h，观察产气情况。 凡乳糖发酵管产气，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，即报告为大肠杆菌阳性；凡乳糖发酵管不产气或革兰氏染色为阳性，则报告为大肠杆菌为阴性。 5.报告 根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100ml（g）食品中大肠菌群的最可能数。 乳糖胆盐发酵管 大肠杆菌（右管）产酸产气 *