食品中肉毒梭菌的检验摘要.ppt

* 一、生物学特性 1、肉毒梭菌 肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽孢杆菌属，具有该菌的基本特性，即厌氧性的杆状菌，形成芽孢，芽孢比营养体宽，呈梭状，新鲜培养基的革兰氏染色为阳性，产生剧烈细菌外毒素。 肉毒梭菌为多形态细菌，约为4×1μm的大杆菌，两侧平行，两端钝圆，直杆状或稍弯曲，芽孢为卵圆形，位于次极端，或偶有位于中央，常见很多游离芽孢。有时形成长丝状或链状，有时能见到舟形、带把柄的柠檬形、蛇样线状、染色较深的球茎状，这些属于退化型。当菌体开始形成芽孢时，常常伴随着自溶现象，可见到阴影。 肉毒梭菌具有4~8根周生性鞭毛，运动迟缓，不生荚膜。 在固体培养基表面上，形成不正圆形，大约3mm左右的菌落。菌落半透明，表面呈颗粒状，边缘不整齐，界限不明显，向外扩散，呈绒毛网状，常常扩散成菌苔。在血平板上，出现与菌落几乎等大或者较大的溶血环。在乳糖卵黄牛乳平板上的菌落为乳浊，菌落表面及周围形成彩虹薄层，不分解乳糖；分解蛋白的菌株，菌落周围出现透明环。 肉毒梭菌发育最适温度为25~35。C,培养基的最适pH为6.0~8.2。肉毒梭菌的生化性状很不规律，即使同种，也常见到株间的差异。如表： 各型肉毒梭菌的生化反应 型别 反应 葡萄糖发酵 麦芽糖发酵 乳糖发酵 蔗糖发酵 靛基质发酵 胆胶液化 牛乳消化 A B C D E F + + - (+-) - (+) + + + - (+-) - (+) (+-) + (+-) - (+-) (-) (+-) - + (+-) (-) (+-) (-) (+-) - + (+) - (+-) - (+-) - + + - (+-) - (+) (+) 注：+阳性反应；-阴性反应；（+-）视菌株而异；（+）多为阳性反应；（-）多为阴性反应 根据肉毒毒素的抗原性，肉毒梭菌至今已有A、B、C、(1、2）、D、E、F、G等七个型。引起人群中毒的，主要有A、B、E三型。C、D二型主要是畜、禽肉毒中毒的病原。F、G型肉毒梭菌极少分离，未见G型菌引起人群中毒的报道。 案例： 肉毒梭菌广泛存在于自然界引起中毒的食品有腊肠、火腿等。在美国以罐头发生中毒较多，日本以鱼制品较多，我国主要以发酵食品有关，如臭豆腐、豆瓣酱等。其它引起中毒的食品还有：烤土豆、炒洋葱等。 危害：肉毒梭菌是致死性最高的病原体之一。感染剂量极低，每个人都易感。症状为虚弱、眩晕、伴随视觉模糊等，也会出现腹胀和便秘。毒素最终引起麻痹，呈渐进对称性、自上到下。 2、肉毒毒素 肉毒梭菌的致病性在于其产生的神经麻痹毒素，即肉毒毒素，而细菌本身则是一种腐生菌。各个型的肉毒梭菌分别产生相应的毒素，所以，肉毒毒素也分为A、B、C、D、E、F、G等七个型。C型包括C1、C2二个亚型。 A型毒素经60。C约2min加热，几乎能被完全破坏，而B、E二型毒素要经70。C约2min才能被破坏；C、D二型毒素对热的抵抗更大些；C型毒素要经过90。C约2min加热才能完全破坏，但只要煮沸1min或75。C加热5~10min，毒素都能被完全破坏。 肉毒毒素对酸性反应比较稳定，对碱性反应比较敏感。 案例：肉毒毒素的毒性极强，是最强的神经麻痹毒素之一，据称，精致毒素1μg的毒力为200000小白鼠（20g）致死量，也就是说，1g毒素能杀死400万t小白鼠，一个人的致死量大概1μg左右。 危害：肉毒中毒是由于误食含有肉毒毒素的食品而引起的食物中毒。人的肉毒中毒发生并不多，但是发病急、病程发展快、病死率高。肉毒中毒是毒素型中毒，潜伏期较短，一般为6~36h，最长60h。主要症状有：视力减弱、全身无力、神社和张口困难、抬头费力、瞳孔散大、呼吸麻痹等。重症患者，如果不及时治疗和抗毒素特异治疗，多在2~4天死亡。 肉毒中毒一年四季均可发生，发病主要与饮食习惯有着密切关系。 二、检验所需器材 检验食品中肉毒梭菌一般需要以下培养基和试剂：庖肉培养基、卵黄琼脂培养基、明胶磷酸盐缓冲液、肉毒分型抗毒诊断血清、胰酶（活力1：250）、革兰氏染色液等。 检验食品中肉毒梭菌还需要以下设备和器材：离心机及分离管、研体及细砂、培养箱、显微镜、厌氧培养装置（常温催化除氧式或焦性没石子酸除氧式）、1mL和10mL吸管、1mL注射器、平皿、接种环、载玻片、小白鼠等。 三、检验程序 检样（食品） 毒素检测 增菌、产毒培 养30。C，5天 报告（一） 毒素检测 报告（二） 观察生长性 状、染