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免 疫 诊 断 P241 （一）抗原抗体反应的基本原理 1.特异性： 2.可逆性：非共价可逆结合 反应条件：亲和力; 温度、PH、离子浓度 3.可见性：抗原抗体比例适当 (二)抗原或抗体的检测方法： 1.凝集反应： 颗粒性抗原(细菌、红细胞等)与相应抗体结合，在有电解质存在时，比例适当，形成肉眼可见的凝集团块。 （1）直接凝集： 玻片法：定性检测未知抗原 如ABO血型鉴定、细菌鉴定 试管法：定量检测未知抗体 如肥达氏反应 （2）间接凝集：载体颗粒（RBC、乳胶等） 间接凝集：包被已知抗原，如Coombs test 反向间接凝集：包被已知抗体 间接凝集抑制反应：妊娠乳胶试验(HCG) 2.沉淀反应： 可溶性抗原（血清蛋白、细胞裂解液等）与相应抗体结合后，在有电解质存在时，比例适当，出现肉眼可见的沉淀物。 半固体琼脂凝胶为介质。 原理: 检测抗原 （2）双向免疫扩散： (3)对流免疫电泳： （4）免疫电泳 原理：电泳后双扩 3.免疫标记技术： 标记物：荧光素、酶、放射性核素等 特点：敏感性高，定性、定位、定量 （1）免疫荧光法： FITC、PE （2）酶免疫测定：HRP、AP *酶免疫组化法： 测定组织中或细胞表面抗原 *酶联免疫吸附试验（ELISA）： 测定可溶性抗原或抗体 ELISA原理： 将已知抗原或抗体吸附于固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤液将游离成分洗去。 方法： *双抗体夹心法： 检测抗原 *间接法： 检测抗体 （3）放射免疫测定法（RIA）： 131I、125I标记，微量物质测定 第二节 淋巴细胞的测定 外周血单个核细胞（PBMC）分离： 密度梯度分离法 淋巴细胞亚群的分离与鉴定： 尼龙毛分离法： E花结实验： 流式细胞术： Lc功能测定： 1.淋巴细胞增殖/转化试验： 原理： 有丝分裂原等非特异刺激T、B细胞向淋巴母细胞转化、增殖。 方法： MTT法： 2. T细胞介导的细胞毒试验：CTL 3. B细胞溶血空斑实验： 免 疫 预 防 特异性免疫的获得方式： 1.自然免疫： 2.人工免疫：主动、被动免疫 一、人工主动免疫 概念： 用具有免疫原性的物质接种机体，使之产生特异性免疫，从而预防感染的措施。 疫苗 （一）传统疫苗： 1．灭活疫苗（死疫苗）： 2．减毒活疫苗： 3．类毒素： 灭活疫苗和减毒活疫苗的特性比较 （二）新型疫苗： 1．亚单位疫苗：保留有效免疫原成分 2．结合疫苗：TI-Ag+载体→TD-Ag 3．合成肽疫苗： 4．基因工程疫苗： 重组抗原疫苗： 重组载体疫苗： DNA疫苗: 转基因植物疫苗： 二、人工被动免疫 概念： 给人体注射含有特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂，以治疗或紧急预防感染的措施。 常用制剂： （一）动物免疫血清: （二）人免疫球蛋白制剂 1.丙种球蛋白： 紧急预防甲肝、麻疹、脊髓灰质炎 2.人特异性免疫球蛋白： 如抗乙肝病毒免疫球蛋白 （三）细胞因子制剂：IL-2、IFN等 （四）单克隆抗体制剂： 免疫治疗 免疫增强疗法： 免疫抑制疗法： 特异性免疫治疗： 非特异性免疫治疗： 主动免疫治疗： 被动免疫治疗： （一）抗原类制剂：疫苗、瘤苗、自身抗原 （二）抗体类制剂 1.免疫血清： 2.抗淋巴细胞丙种球蛋白： 3.抗肿瘤抗体制剂：靶向治疗 常用细胞毒物质：放射性核素、化疗药物、毒素 存在问题： 鼠源性抗体；对实体肿瘤穿透力差；特异性不高。 4.抗细胞因子抗体：如用抗IL-1治疗RA。 （三）免疫细胞类制剂： 1．造血干细胞移植：骨髓移植、脐血转输 2．过继免疫疗法： CIK：cytokine induces killer cells.细胞因子诱导的杀伤细胞。主要源于NK（外周血淋巴细胞）。 TIL：tumor infiltrating lymphocytes,肿瘤浸润性淋巴细胞。源于实体瘤组织，更强的杀伤活性。 （四）生物应答调节剂： BRM，具有促进或调节免疫功能的制剂，通常对免疫功能正常者无影响，对免疫功能异常尤其是免疫功能低下者有促进和调节作用。