三七病程相关蛋白1基因的克隆及表达分析.pdfVIP

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2016-05-14 发布于安徽
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三七病程相关蛋白1基因的克隆及表达分析.pdf

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124 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 14, 49 ( 1): 124 130 七病程相关蛋白 1 基因的克隆与表达分析 1, 2 2 1 1 1 1* 1* 李瑞博 , 崔秀明 , 刘玉忠 , 吴志刚 , 林淑芳 , 申业 , 黄璐琦 (1. 中国中医科学院中药资源中心, 北京 100070; 2. 昆明理工大学生命科学与技术学院, 云南昆明 650000) 摘要: 在生物信息学分析基础上, 采用逆转录聚合酶链式反应 (RT-PCR) 方法从三七中获得病程相关蛋白1 (pathogensis-related protein 1, PR1) 基因的开放阅读框, 命名为PnPR1 , 测序结果显示该序列长50 1 bp, 编码 166 个氨基酸, 其蛋白质分子质量为 18.1 kD 。利用NCBI/Blastp 和BioEdit 软件进行同源性比对显示, PnPR1 基因编码蛋白与葡萄、烟草、番茄等高等植物中的PR1 蛋白同源性较高, 且具有相同的富含半胱氨酸蛋白的保守结构域。将构建的重组载体pET28a(+)-PnPR1 在宿主菌Escherichia coli BL21 中经异丙基硫代- -D-半乳糖苷 (IPTG) 诱导表达融合蛋白, 在不同诱导时间、诱导温度、IPTG 诱导浓度和 IPTG 添加时间下对诱导条件进行优化。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS) 分析结果表明, PnPR1 基因编码蛋白的最佳诱导条件为: IPTG 终浓度0.4 mmol ·L 1、IPTG 添加时间为转接后4 h 、诱导温度28 ℃、诱导时间20 h 。这为蛋白纯化及单克隆抗体的制备奠定了一定的基础。关键词: 三七; 病程相关蛋白; 生物信息学分析; 原核表达; 条件优化中图分类号: R93 1 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 14) 0 1-0124-07 Cloning and expression analysis of pathogenesis-related protein 1 gene of Panax notoginseng 1, 2 2 1 1 1 LI Rui-bo , CUI Xiu-ming , LIU Yu-zhong , WU Zhi-gang , LIN Shu-fang , SHEN Ye1*, HUANG Lu-qi1* (1. National Resource Centerf or Chinese Materia Medica of China Academy of Chinese Medical Sciences, Beij ing 100070, China ; 2. Faculty of Life Science and Technology, Kunming University of Scie