白木香倍半萜合酶基因asss4的克隆、原核表达及功能鉴定.pdfVIP

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2016-05-14 发布于安徽
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白木香倍半萜合酶基因asss4的克隆、原核表达及功能鉴定.pdf

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1724 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 14, 49 ( 12): 1724 1729 木香倍半萜合酶基因AsSS4 的克隆、原核表达与功能鉴定 1, 2 3 1, 4* 1 5 1 良 , 郭庆梅 , 张争 , 徐艳红 , 韩晓敏 , 刘娟 (1. 中国医学科学院、北京协和医学院药用植物研究所, 北京 100193; 2. 聊城市人民医院, 山东聊城 252000; 3. 山东中医药大学药学院, 山东济南 250012; 4. 中国医学科学院、北京协和医学院药用植物研究所海南分所 (海南省南药资源保护与开发重点实验室), 海南万宁 57 1533; 5. 燕山大学环境与化学工程学院, 河北秦皇岛 066004) 摘要: 通过 RT-PCR 方法从伤害处理的白木香树木质部中克隆得到沉香倍半萜合酶 4 (sesquiterpene synthase 4, AsSS4) 基因的全长开放读码框, 该基因全长读码框为 1 698 bp, 编码包含565 个氨基酸的蛋白质。将 AsSS4 基因与原核表达载体 pET28a 相连构建重组载体 pET28a-AsSS4, 把重组载体转入大肠杆菌 BL2 1 (DE3) p Lys S 中, 用IPTG 诱导重组菌, 经SDS电泳分析, 获得分子质量约为64 kD 的重组AsSS4 蛋白。利用镍凝胶亲和色谱法获得纯度较高的AsSS4 蛋白, 以法尼基焦磷酸 (FPP) 为底物进行蛋白酶促反应, 共催化产生 5 种倍半萜类成分: cyclohexane, 1-ethenyl-1-methyl-2, 4-bis(1-methylethenyl)- 、-elemene、α-guaiene 、α-caryophyllene 和 δ-guaiene 。本研究首次证实了白木香倍半萜合酶AsSS4 基因的功能, 为揭示伤害诱导沉香倍半萜形成的分子机制奠定了理论基础。关键词: 白木香; 倍半萜合酶基因; 原核表达; 基因功能中图分类号: R93 1 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 14) 12- 1724-06 Cloning, prokaryotic expression, and functional identification of a sesquiterpene synthase gene (AsSS4) from Aquilaria sinensis 1, 2 3 1, 4* 1 5 1 LIANG Liang , GUO Qing-mei , ZHANG Zheng , XU Yan-hong , HAN Xiao-min , LIU Juan (1. Instituent of Medicinal Plant Development, Chinese Ac ademy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 10