乙肝病毒X基因和IAP家族基因在肝癌发病中的作用及其关系.pdfVIP

乙肝病毒X基因和lAP家族基因在肝癌发病中的作用及关系 摘要 摘要 Bvirus，HBV)与肝癌的发生发展有密切的关系。 乙型肝炎病毒(hepatitis 研究发现，乙肝病毒X蛋白(HBX)具有反式激活作用，并可促细胞凋亡，参与 of 肝癌的发生。lAP(inhibitors apoptosis)家族是一类细胞内源性抗凋亡蛋 白，与肿瘤的发生密切相关。本研究为了阐明HBX与IAP家族基因在肝癌发病中 的作用及其关系，在组织水平、细胞水平和分子水平上，对乙肝病毒x基因和 survivin基因进行了深入细致的探讨。 该研究内容有以下三个主要方面： 第一：在肝组织上研究HBV和IAP家族基因表达的情况，阐明其相互关系。 这一研究应用免疫组化方法，检测了乙肝病毒三种抗原(HBsAg、HBcAg和HBxAg) 变组织中的表达，从中筛选出密切相关的因素。初步结果发现，在肝癌组织和肝 pcDNA3一Sur真核表达载体，并对从德国获得的乙肝病毒x基因真核表达载体 研究奠定了基础。第三：乙肝病毒x基因和survivin基因在肝癌细胞中作用的 研究。应用抗癌药阿霉素处理培养的人肝癌细胞，建立了细胞凋亡模型。在此基 在细胞水平和分子水平上乙肝病毒x基因和survivin基因的作用及其相互关系。 最后，进行综合分析，从乙肝病毒x基因与IAP家族，特别是与survivin基因 的相互作用关系，进一步阐明乙肝病毒x基因和survivin基因在肝癌发病中的 作用及其分子机理。该研究未见报道。 主要研究结果如下： 一、免疫组化：通过免疫组化染色，检测了34例HCC和30例肝硬变组织中 and 三种乙肝病毒抗原(HBsAg，HBcAg and XIAP，cIAP—l cIAP一2)的表达情况。结果显示， 在肝癌、癌周和肝硬变组 乙肝病毒X基因和IAP家族基因在肝癌发病中的作用及关系 摘要 的阳性检出率相比无显著差异(PO．05)。HBxAg和SurvJvin表达阳性的细胞多 表达阳性。 增。回收PCR产物，将其构建在中间载体pUCm-T中，扩增后将目的片段回收， 测序证实构建的pcDNA3一sue无突变。此外。对德国提供的乙肝病毒x基因真核 表达载体pC5l【＼『一x进行了鉴定，经DNA测序证实无突变。 三、乙肝病毒x基因和survivin基因的作用及其相互关系的研究：用流式 细胞仪检测发现，90uSt ADR作用H-7402肝癌细胞3小时后15小时，可诱导细 胞凋亡，建立了细胞凋亡模型。在此基础上，分为诱导细胞凋亡组和非诱导细胞 凋亡组，应用脂质体法对培养的H-7402肝癌细胞进行基因转染，实现瞬时表达。 对转染乙肝病毒X基因、转染survivin基因和二者共转染三种不同情况，进行 流式细胞仪检测和WesternBlot，观察肝癌细胞凋亡的变化，以及在上述三种 情况下乙肝病毒X基因和survivin基因表达的变化。结果显示，HBX具有促凋 亡作用，survivin基因具有抑制HBX诱导的细胞凋亡作用。转染的乙肝病毒X 基因可促进内源性survivin的表达。当阿霉素诱导细胞凋亡时，转染乙肝病毒 X基因的细胞凋亡增加，survivin蛋白的表达也相应增加，并可抑制上述作用， 即HBX的表达促进了survivil3蛋白的表达。 综合以上结果，本研究表明ttBX和survivin在乙肝病毒感染后的肝硬变组 织和肝癌组织中呈高水平表达：ttBX具有促凋亡作用，survivin基因具有抑制 HBX诱导的细胞凋亡作用：HBX的表达促进了survivin蛋白的表达。因此，乙肝 病毒X基因和survivin基因在肝癌发病中具有十分重要的作用和密切的关系。 然而，二者具有直接关系，还是间接的关系，其详细机制有待于进一步研究。本 研究结果有助于进一步阐明乙肝病毒的致癌机理，为预防和治疗肝癌提供理论依 据。 关键词：肝癌；乙肝病毒X蛋白