肠源性内毒素易位及其NF-κB活化和大鼠胰腺炎病情加重的关系.pdfVIP

上海交通大学医学院2004 级硕士学位论文 肠源性内毒素易位及NF-κB 活化与 大鼠胰腺炎病情加重的关系 摘 要 目的：1、探讨在大鼠重症急性胰腺炎基础上肠源性内毒素易位及 NF-κB 活化与胰腺炎病情加重之间的关系，以阐明引发胰腺炎病情加重的 具体机制。2 、观察急性胰腺炎肝组织中NF-κB 对TNF-α、ICAM-1 表达 的调控及其在胰腺炎相关的肝损伤中的作用。3、探讨肝脏NF-κB 活化及 肝功能损害在暴发性胰腺炎引起远隔脏器损害中的作用。 方法：1、30只SD大鼠随机分为SO组（假手术组）、SAP组(重症急 性胰腺炎组) 、SAP+LPS组（SAP组基础上给予结肠内注射内毒素 6mg/300g ）、PDTC （NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸酯）干预 组（诱导SAP+LPS前给予腹腔内注射PDTC 100mg/kg ）、LPS组（单纯结 肠内注射内毒素6mg/300g ）。制模后8小时处死大鼠，记录大鼠循环血量、 腹水量，检测血液、腹水生化指标及细胞因子浓度，测定血浆二胺氧化酶 （DAO ）浓度，制作各脏器病理及免疫组织化学染色切片并予以评分。2 、 上述各组制模后8小时处死，血样测定谷丙转氨酶（ALT ）水平，留取肝 组织标本，分别HE染色，光镜检查后行病理学评分，S-P法免疫组化染色， 检测NF-κB 的表达；提取RNA行RT-PCR （NF-κB 、TNF-α、ICAM-1 、β 1 上海交通大学医学院2004 级硕士学位论文 -actin ），抽提核蛋白行WesternBlot和EMSA （Electrophoretic Mobility Shift Assay ）凝胶迁移实验，检测核转录因子NF-κB 的蛋白表达量及结合活性。 3、48 只SD大鼠随机分为SAP+LPS组（SAP组基础上给予结肠内注射内毒 素6mg/300g ）、SO组（假手术组）。分别在制模后0.5h、2h 、4h 、8h小时 处死大鼠，收集血样测定各时间点ALT水平；收集肝脏、肺脏组织标本， 分别HE染色，光镜检查后行病理学评分，SP法免疫组化染色，检测NF-κB 的表达；抽提核蛋白行WesternBlot和EMSA （Electrophoretic Mobility Shift Assay ）凝胶迁移实验，检测核转录因子NF-κB 的蛋白表达量及结合活性。 结果：1、SAP+LPS组大鼠与SAP组大鼠相比，循环血量明显减少， 腹水量明显增加，血浆ALT水平、血淀粉酶及TNF-α、腹水淀粉酶及TNF-α、 血清DAO浓度明显升高，胰、肠、肝、肺、肾的组织病理改变明显，出 现严重的脏器结构受损，肠、肝、肺NF-κB表达明显升高。PDTC干预组 与SAP+LPS组相比各检测指标均有所好转。LPS组各检测指标与SO组相 比无显著差异。2 、SAP+LPS组大鼠肝组织NF-κB表达阳性率、NF-κB活 性、TNF-α、ICAM-1mRNA表达以及血浆ALT水平显著高于SAP组。PDTC 干预组NF-κB活性、TNF-α、ICAM-1mRNA表达以及血浆ALT水平较 SAP+LPS组显著降低。LPS组各检测指标与SO组相比无显著差异。3、 SAP+LPS组大鼠0.5h、2h 、4h肝组织NF-κB表达及活性逐渐升高，8h开始 下降；血浆ALT水平在0.5h、2h 、4h 、8h逐渐升高；肺组织病理学评分与 NF-κB表达及活性在0.5h、2h相比无显著差异，4h 、8h逐渐升高。对照组 2 上海交通大学医学院2004 级硕士学位论文 肝肺组织上述指标各时间点相比无显著差异。SAP+LPS组与SO组各时间 点相比，上述指标均有显著差异。 结论：1、重症急性胰腺炎会引起肠道粘膜屏障功能受损，在此基础 上肠源性内毒素易位可能是胰腺炎病情进行性加重的原因；多脏器组织 NF-κB