色谱柱的日常维护详解.ppt

色谱柱的日常维护 液相色谱柱的保养 柱的稳定性与固定相类型及使用情况有关。如流动相中盐类的存在会使键合相柱的性能衰退；以SiO2为基质的固定相，过程随温度和pH(8)增加而加速。一根柱子使用是否得当，直接影响它的柱效和寿命。对于填装了粒度为10μm以下的固定相的柱子，尤其如此。为了保持柱效、柱容量及渗透性，必须进行仔细地保养。是否会由于柱外效应，使分析柱的柱效明显下降？ 液相色谱柱的保养 1．柱易被极细的颗粒堵塞，因此必须将流动相仔细地蒸馏、过滤。在流动相贮槽与柱之间，使用0.5μm孔径的过滤器。水往往是一个重要的污染源。在水溶液流动相(如缓冲液)中，细菌容易生长，可能堵塞筛板。防止细菌生长的办法是加入抑制剂，如0.01%NaNO3。显然，抑制剂不能干扰分离和测定。 液相色谱柱的保养 2．在恒定压力下，发现流量减少，柱子可能部分堵塞。堵塞最容易发生在极窄的入口接头处以及入口、出口筛板处。堵塞后需要仔细拆洗，清除堵塞物，但必须防止较强的机械震动，防止用热手接触柱子，以扰动柱内的固定相层，使柱效发生变化。 液相色谱柱的保养 3．柱子的实际操作压力应低于填装时的最高压力，最好在最高压力的一半以下。实际操作压力过高，易使入口的固定相层下沉，形成一个空穴。若空穴形成，应重新装柱。在空穴中加入新的匀浆或玻璃微珠，也无法恢复到原来的柱效。 4．应该用进样阀，而不用注射器进样，以防止注射隔膜碎屑集聚在柱入口。 液相色谱柱的保养 5．要防止反冲(流动相逆向流动)，否则使固定相层位移，柱效下降。 6．柱子两端用金属螺帽封闭，保存在纯净的有机溶剂中。应该将柱子保存在以下pH范围内的水溶液流动相中：2pH8.5。为了长期保存，最好用纯有机溶剂(如甲醇)清洗柱子。 7．一定要防止柱子干涸，特别是硬胶柱。 液相色谱柱的保养 8．使用卫柱(Guard Column,亦称预柱)。连续注射含有强滞留(不被洗脱)组分的样品，将使柱效下降，保留值改变，选择性变坏，柱寿命缩短。为了延长柱寿命，在进样阀和分析柱之间加上卫柱。 卫柱较短(5~10cm)，固定相与分析柱类似。其作用是吸着强滞留的组分，防止对分析柱的污染，保持分析柱性能稳定。实验表明，只要卫柱与高效、小粒度分析柱联用，除了使k’为零的组分的塔板数大大减少外，对k’值较大的组分，其柱效下降很少。 色谱柱是否与进样口和检测器正确地连接 进样口是否漏 更换进样垫 检查进样衬管是否损坏 柱是否与进样口连接？? 是否使用自动进样器 检查进样针 更换进样针推杆 样品瓶中是否有足够的样品，以便进样针能吸到样品？ 若使用冷柱头进样，检查TEFLON垫是否有漏 点火了吗？ (FID) 柱中是否有载气 火点着了吗? 用一个玻璃片放在 FID 出口---- 有水蒸汽冷凝 检测仪器的输出值-- 数值是否大于 0.0？ 应大约为 16.2 pico amps 柱中是否有载气? 拆开柱到检测器一端 用流量计（或皂沫流量计）测量 有流量 综合 已点火 柱出口有流量 检测器喷嘴可能被堵塞 检查FID组件 （注意—请记录零件的安装顺序） 检查喷嘴本身 -- 被石墨碎屑堵塞（拆下柱子时，石墨垫的外型有变化） 用旧的进样针清除堵塞物 重新安装FID组件 再次进样 基线不好的问题 (检查气源的质量) 柱过载 减少进样量或将样品稀释10倍 稀释样品可以得到较好的结果 试一下较厚液膜的其他色谱柱 前面介绍的所有内容均适用 前伸峰和拖尾峰均说明是非线形的分配——即色谱柱与样品不匹配 使用不同选择性的色谱柱可以解决这个问题 分析过程中基线位置突然变化 基线偏离或漂移 基线偏离 不规律地升高或降低 在整个色谱过程中基线不规律地升高或降低 偏离或漂移是由于下列原因产生的 温度 流速 基线漂移 正确地使用高纯度的载气 色谱柱老化 色谱柱的最高使用温度不能超过该柱所规定的最高温度极限 进样口温度与检测器温度要高于色谱柱的最高使用温度 基线噪音 色谱图的基线噪音太高 □ 进样垫流失 密封垫的类型不对或使用时间过常，需要更换 □ 衬管被污染 新的密封垫在柱温箱中老化过夜，以除去易挥发性化合物 vespel 密封垫不能超过使用温度 (350 ℃) □ 衬管被污染 较脏的样品每进样15—20次后，更换新的衬管 □ 气源可能被污染 选择正确的在线气体净化器 (traps) □实验室是否有异常的气体 每使用四瓶气体，至少要更换一次气体净化器 检测器可能已被污染——清洗检测器 流失 (MSD) 由柱外产生的杂峰 进样垫 柱故障的诊断与排除附加峰 (第一页) 鬼峰 柱头污染 烘焙色谱柱，然后做空