第八章发酵机制及发酵过程动力学重点分析.ppt

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典型微生物的生长速度 * 参阅江西师范大学课件 * * Turbidity n.混浊, 混乱 * 从上述二种类型可以分析,如果生产的产品是菌体细胞,则宜采用有利于细胞生长的培养条件,延长与产物合成有关的对数生长期。如果产品是次级代谢产物,则宜缩短菌体的对数生长期,并迅速获得足够量的菌体细胞后延长生产期,以提高产量。 * 带放是指放掉的发酵液和其他正常放罐的发酵液一起送去提炼工段。 基质的比消耗速率σ * Growth cycle of populations in batch culture 迟滞期 对数生长期 稳 定 期 死亡期 微生物生长的各阶段特征 生长阶段 特征 延滞期 细胞不分裂(不生长),但细胞变大,细胞内RNA含量增高,原生质呈碱性,合成代谢活跃,易合成新的诱导酶,对外界环境变化敏感。接种物中死细胞较多或培养基不丰富时延滞期较长 指数期 细胞分裂(生长)最快,细胞进行平衡生长,酶系活跃,代谢旺盛。生长速率由营养成分和培养条件决定 稳定期(静止期) 新繁殖的细胞与死亡细胞数目相等,菌体产量达到最高,细胞开始储藏糖原、脂肪等储藏物,产芽孢的开始形成芽孢,开始合成次生代谢产物。可能由于营养物的消耗或抑制生长的代谢产物积累,细胞停止增殖,但仍存活 衰亡期 死亡细胞数目超过新生细胞,细胞形态多样,细胞开始自溶,开始释放次生代谢产物 1. 分批发酵的基础理论 式中:X0——原始菌体浓度,g/L; Xt——经间隔时间t后的菌体浓度; μ——比生长速率,h-1。 将菌体的自然对数与时间作图可得一直线,其斜率是μ。微生物在指数生长期间的比生长速率最大( μmax)。 典型微生物μmax值如下:产黄青霉菌0.12,构巢曲霉菌0.36,甲烷单孢菌0.53,贝内克氏菌4.24 h-1 。 在分批培养过程中根据产物生成是否与菌体生长同步的关系,Pirt(1975)将微生物产物形成动力学分为与生长有联系的和与生长无联系的类型。 A.生长关联型 与生长有关的产物形成,可用下式描述: qP=Yp/X·μ 式中: qP ——产物形成比速率,g/h·L; Yp/X ——菌体生长为基准的产物得率(g/g) ; μ——比生长速率,h-1。 B.非生长关联型 产物的形成速度只与细胞积累量有关,可用下式描述: 式中: β——比例常数; dP/dt——产物合成速度g/L ·h; X——菌体浓度g/L。 抗生素发酵过程可分为三个阶段:菌体生长期、抗生素合成期和菌体自溶期 图 杀念珠菌发酵中葡萄糖、DNA、抗生素产量的代谢变化 A-DNA; B—葡萄糖; C—杀念珠菌素产量 2. 重要的生长参数 (下图)在浓度较低的(A-B)范围内,静止期的细胞浓度与初始基质浓度成正比: X=Y(S0-St) 在后期,菌量不随初始基质浓度的增加而增加,菌的生长受到有害代谢物的抑制。可用Monod方程描述μ和s之间的关系: 3.分批发酵的优缺点 产物为细胞本身:维持最高生长量的条件 产物为初级代谢产物:延长与产物关联的对数生长期; 产物为次级代谢产物:缩短对数生长期,延长生产期,或降低对数期的生长速率。 优缺点: 操作简单,周期短,染菌的机会减少,产品质量易掌握; 存在基质抑制问题,出现二次生长现象,产品产量低。 二 补料分批发酵 在分批培养过程中补入新鲜的料液,以克服营养不足而导致的发酵过早结束的缺点。 在此过程中只有料液的加入没有料液的取出,所以发酵结束时发酵液体积比发酵开始时有所增加。在工厂的实际生产中采用这种方法很多。 补料分批发酵又称半连续发酵,是指在分批培养过程中,间歇或连续地补加新鲜培养基的培养方法。 Xt=X0+Y(S0-St) 补料分批发酵与传统分批发酵相比,其优点在于使发酵系统中维持很低的基质浓度。 低基质浓度的优点: 1)可以除去快速利用碳源的阻遏效应,并维持适当的菌体浓度,使不致于加剧供氧的矛盾。 2)避免培养基积累有毒代谢物。 与连续发酵相比,补料分批发酵不需要严格的无菌条件,也不会产生菌种老化和变异等问题,其应用范围十分广泛,包括抗生素、氨基酸、酶蛋白、核苷酸、有机酸及高聚物等。 缺点 由于没有物料取出,产物的积累最终导致比生产速率的下降。由于有物料的加入增加了染菌机会 三 半连续发酵 在补料-分批发酵的基础上加上间歇放掉部分发酵液称为半连续发酵。 优点:放掉部分发酵液,再补入部分料液,使代谢有害物得以稀释有利于产物合成,提高了总产量。 不足:损失部分养分、前体

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