第六章固定化酶详解.ppt

这是由于固定化载体成为扩散障碍，使反应产物向外扩散受到一定的限制所造成的。当反应产物为酸性时，由于扩散受到限制而积累在固定化酶所处的催化区域内，使此区域内的pH比降低，必须提高周围反应液的pH，才能达到酶所要求的pH。为此，固定化酶的最适pH比游离酶要高一些。反之，反应产物为碱性时，由于它的积累使固定化酶催化区域的pH升高，故此使固定化酶的最适pH比游离酶的最适pH要低一些。 固定化酶最适温度的变化 一般与游离酶差不多，但有些会有较明显的变化 Eg：用重氮法制备的固定化胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶，其作用的最适温度比游离酶高5—10 以共价结合法固定化的色氨酸酶，其最适温度比游离酶高5—15 同一种酶，用不同的方法或不同的载体进行固定化后，其最适温度也有可能提高。 Eg：氨基酰化酶，用DEAE-葡聚糖凝胶经离子键结合法固定化后，其最适温度（72）比游离酶的最适温度（60）提高12度；用DEAE-纤维素固定化的，其最适温度（67）比游离酶提高7度；而用烷基化法固定化的氨基酰化酶，其最适温度却比游离酶有所降低。 固定化酶作用的最适温度可能会受到固定方法和固定化载体的影响。 B 叠氮法 缺点： 1.对底物和产物的要求是可以穿过细胞壁细胞膜。 2.会形成大量的副产物，降低了纯度。 3.维持固定化细胞持续的催化活性远比酶要复杂，有些细胞在条件不适宜的情况下很容易发生自溶，影响产品的稳定性。 * * * * 4． 固定化酶和亲和色谱 亲和技术的基础：是生物活性化合物生物特异信息的综合。 利用了生命现象中生物分子间特有的高亲和力、高专一性，可逆结合而设计的纯化方法 是唯一能够体现待分离物质间生物学功能差异的分离方法 5． 固定化酶与环境保护 一：环境监测 二：污染物处理。 6． 新能源开发中的应用 H2是重要的能源物质，虽然有许多微生物可以产生H2，但产氢系统不稳定。有人利用固定化丁酸梭菌连续产氢，稳定性比天然细胞好。 将植物的叶绿体中的铁氧还原蛋白氧化酶系统用胶原膜包被，可用于水的光介产生氢气和氧气 7． 固定化酶在基础理论研究中应用 阐明酶反应机理 揭示酶原激活机理 酶亚基性质的研究 研究蛋白质-核酸分子结构 例：用N,N-亚苯基双马来酰胺交联的肌球蛋白，手臂长度推算出活性中心两个必需巯基间的距离是1.2-1.4 nm 研究蛋白质-核酸分子结构 连续的固定化酶柱进行DNA序列分析 原理：是测定DNA聚合时，以掺入dNTP同时释放的焦磷酸判断是否发生了聚合反应，进而确定掺入的是哪种核苷酸从而推导出序列 ——该系统由连续的6个固定化酶柱组成 焦磷酸酶、DNA聚合酶、甘油激酶、己糖激酶、ATP磷酸化酶，荧光酶柱 第六节结束 酶反应器 应用 分批搅拌反应器。 连续流搅拌桶反应器。 连续搅拌桶-超滤反应器 填充床反应器 循环反应器 流化床反应器 工农业生产上的应用 医药治疗上的应用 分析化学中应用 亲和色谱 环境保护 新能源开发中 基础理论研究 青霉素酰化酶 制造人工肾 酶电极 第六节结束 点击返回 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 鼓泡塔型反应器 适用对象：反应中涉及气体的吸收或产生时适用。 气体进入方式： 与底物一起从底部进入，经过气体分散板分散。 和循环液从底部以切线方向进入。 生物催化反应－分离耦合反应器 Diagram of the enzymatic synthesis of cefaclor with in situ product removal. (1) Complexation reactor, (2) enzymatic reaction reactor, (3) peristaltic pump, (4) sintered-glass (G2), (5) mechanical stirrer. 反应－分离耦合反应器成功实现产物在线分离 青霉素酰化酶生物催化合成头孢克罗 产物在线分离策略实现头孢克罗半连续制备 Journal of Molecular Catalysis, 17(2):81-87, 2003. Biotechnology Letters, 2003, 25 (14): 1195-1198. J. Molecular Catalysis B: Enzymatic,2003,26 (1-2):99-104. Journal of Chemical Technology and Biotechnology, 2004, 79:480-485. 减压式反应器用于生物催化反应中易挥发产物的在线去除 Wei Dongzhi*, Yu ying, Biocatalysis and Biotransformation, 2