第十一章监察制度和质量检验详解.pptVIP

检测外源病毒时，亦可采用致细胞病变和(或)红细胞吸附试验。先用相应的特异性血清中和后，接种敏感的细胞单层进行培养。 A. 致细胞病变的检测 取经传代后培养至少7天的细胞单层(每个cm2)1个或多个，用适宜染色液，对细胞单层进行染色，观察细胞单层，检查包涵体、巨细胞的数目异常或其它由外源病毒引起的细胞病变的出现情况。 (3) 用细胞单层生产的病毒性活疫苗 检验方法： 取传代后培养7天以上的细胞单层(每个6cm2)至少1瓶，以PBS洗涤细胞单层数次，加入0.2%红细胞悬液适量，覆盖整个单层表面。 红细胞悬液应是豚鼠红细胞、人O型红细胞、鸡红细胞的等量混合悬液，混合或 分别滴加于不同的细胞单层上。4?C放置30min，用PBS洗涤，检查红细胞吸附情况。 若无明显的红细胞吸附现象可重复一次，在细胞单层加入红细胞悬液后置20～25?C培养30 min，用PBS洗涤，再次检查红细胞吸附情况。 (3) 用细胞单层生产的病毒性活疫苗 —— 红细胞吸附病毒的检测 若出现外源病毒所致的特异性细胞病变或有红细胞吸附现象，判不合格。 若疑有外源病毒污染，但又不能通过其它试验排除这种可能性，则作不合格处理。 (3) 用细胞单层生产的病毒性活疫苗 —— 判定 制品的效力是指它的使用价值。 效力不好的制品，如为疫苗和类毒素，则无法有效地控制疫情。 治疗用的血清，则无法医治病畜，从而使疫病蔓延。 诊断制品，则影响检疫及诊断的正确性。 （三）效力检验 （三）效力检验 （1）免疫原性 菌(毒)种的免疫原性优劣，决定生物制品质量的重要因素，除其作为免疫原的能力外，还与血清型等经诸多因素有关，是生物制品菌(毒)种检验的重要方面。 如制猪丹毒灭活疫苗的菌种应选择2型菌，因为2型菌株免疫原性良好，试验证明对其它菌型也有免疫力。又如流感与口蹄疫，因其在流行中病原常有型的变化，所以用以制备疫苗毒株的型必须与流行型相对应。否则即使是制品的免疫原性良好，也收不到免疫效果。 1．效力检验的内容 (2) 制品的免疫持续期 不同主动制品免疫持续期各异，理想制品应具有较长的免疫持续期，免疫持续过短的应考虑增加免疫接种的次数。 免疫持续期通常是在选育菌(毒)种时测定。 1．效力检验的内容 (3) 抗原的稳定性 一般灭活苗和血清的热稳定性较好，弱毒疫苗较差，但也随制品的种类而异，制品热稳定性也与制品中所加入的稳定剂或制备工艺有关。 1．效力检验的内容 (4) 抗原量的测定 疫苗效力取决于接种动物的抗原量，即一定量病毒(细菌)才能在体内增殖到一定程度，促使机体产生免疫应答。 若数量不够，则达不到免疫效果。所以，常以测定抗原量来检查制品的效力，当然实验室的检定指标应和使用效果一致。 1．效力检验的内容 所用动物依制品而异，但使用敏感小动物应与使用对象动物有平行关系，禽用疫苗一般均使用对象动物作检验。 当小动物检验如遇有某种原因难以判断者，可以改用制品使用对象动物检验。使用对象动物检验不合格者，不能再用小动物重检。有的制品没有相应小动物，只能用使用对象动物检验，如抗猪瘟血清与羊痘活疫苗只能用猪和羊效检。 动物保护试验的方法有多种，但凡需攻毒者，均应设立同品种同来源的同批动物作对照组，并必须在特设的隔离强毒动物舍内进行。 2．成品的效力检验 （1）动物保护力试验 —— 使用动物的原则 这种方法是以待检品接种动物，经2~3周后，用相应的强毒攻击。观察动物接种后所建立的主动免疫抗感染水平，即以动物的存活或不受感染的情况来判定制品的效力。 （1）动物保护力试验 —— 定量强毒攻击法 例如： 猪丹毒活疫苗效检，用小鼠10只，每只注射0.02个使用剂量猪丹毒活疫苗，14天以后连同未接种的小鼠3只攻击1000个小鼠MLD强毒，另3只攻1个MLD。观察10天，免疫组存活8只以上，攻1000MLD对照组全死、攻1个MLD对照小鼠至少死亡2只为合格。 如以猪检验则用易感猪10头，其中5头接种疫苗，每头注射1m1活疫苗，14天后连同对照组5头，每头攻击致死量的强毒，免疫猪保护4头以上，对照猪全部发病，并有2头以上死亡，疫苗为效力合格。 这种方法是把动物分为两大组，一为免疫组，一为对照组，两大组又各分为相等的若干小组，每小组动物数相等。 免疫动物均用同一剂量的制品接种免疫，经一定时间后，与对照组同时用不同稀释倍数强毒攻击，比较免疫组与对照组的存活率。 按LD50计算，如对照组攻10-5稀释毒有50%的动物死亡，而免疫组攻10-3稀释毒死50%，即免疫组对强毒的耐受力比对照