药敏试验教案.pptVIP

（三）结果判断和报告 读取椭圆环与E试验试条的交界点IC值。 与NCCLS的稀释法MIC参考值高度相关。 四、药物敏感试验结果解释 “敏感”即表示测试菌可被测定药物常规剂量 给药后在体内达到的血药浓度所抑制 “耐药”即表示测试菌不能被在体内感染部位 可能达到的抗菌药物浓度所抑制，临 床治疗无效。 “中介”者提示该细菌对常规用药体液或组织 中的药物浓度的反应率低于敏感株， 使用高于正常给药量有疗效。 五、自动化仪器检测 Viter－ATB系统和Microscan是半 自动或全自动细菌鉴定和药敏系统， 通过系统中药敏专家系统可报告分离 菌的药敏结果。 第三节 细菌耐药性和产生机制 一、细菌的耐药性 对某种抗菌药物敏感细菌变成对该药物 耐受称细菌耐药性。 它可分为天然耐药和获得性耐药，前者是通过染色体DNA突变而致，后者往往是由质粒、噬菌体及其他遗传物质携带外来DNA片段导致产生的耐药性。 突变可由细菌自发产生或在X线等物理因 素或化学物质诱导产生，一般只对一种或两 种相似药物耐药，在细菌耐药性上不占主要 地位。 获得性耐药可通过接合、转化。转导、转换形式产生耐药 。 二、细菌耐药性的生物化学机制 1. 产生β－内酰胺酶，水解药物β－内酰 胺环而失去抗菌活性。 2. 产生钝化酶使抗生素失活，钝化酶有三类： ① 氨基糖苷类钝化酶 ； ② 氯霉素乙酸转移酶； ③ 红霉素酶和其他灭活酶。 3.青霉素结合蛋白改变，导致对抗生素的 亲和力下降 。 4.药物作用靶位的改变使抗生素不易结 合产生耐药性。 5.抗菌药物渗透障碍，如外膜蛋白减少 和药物外排作用等。 6.代谢途径的改变 。 第四节 细菌耐药性检测 一、特殊菌耐药性表型检测 （一）耐药筛选试验：琼脂筛选试验 以单一药物单一浓度检测某种细菌的耐药性。 在含一定浓度测试药物的特殊培养上，点种0.5麦氏比浊度直接菌落配制细菌悬液，35℃孵育24h后观察平板上是否有菌落生长识要有1个菌落生长，均视为耐药。 临床上常用于对耐甲氧西林葡萄球菌、耐 万古霉素肠球菌，对庆大霉素或链霉素高水平 耐药的肠球菌的检测。 （二）折点敏感试验 仅用特定抗生素浓度（敏感、中介或耐药 折点MIC）而不使用测定MIC时所用系列对 倍抗生素浓度测试细菌对药物的敏感性称 折点敏感试验。当选择区分中介和耐药折 点值药物浓度时，若两种抗药物浓度培养 基均生长可判断为耐药；如在两种药物浓 度均不生长则为敏感；仅在较低药物浓度 培养基中生长提示为中介。 （三）双相纸片试验 挑取血平板上菌落，稀释成0.5麦氏浓 度菌液。均匀涂布于MH平板。中央贴上阿莫 西林/克拉维酸纸片，在距该纸片25mm处分 别贴头孢噻肟或头孢曲松、头孢他啶和氨曲 南等药敏纸片作为指示剂，35℃孵育18h观察 结果。 若指示剂在朝向阿莫西林/克拉维酸方向 有抑菌圈扩大的现象（协同现象），则说明 待检菌产生超广谱β－内酰胺酶。 （四）自动化仪器 自动化仪器Microscan有测定抗菌药物抑 菌的MIC值功能。 原理是先测定细菌对抗生素的MIC值， 当头孢他啶与头孢他啶十克拉维酸的MIC比 值或头孢噻肟与头孢噻肟十克拉维酸的MIC 比值大于或等于8（即3个对倍稀释度）即判 定为此细菌产生ESBL。 二、 β－内酰胺酶检测 1.头孢哨噻吩滤纸片法 用接种环挑取受试菌于商品化头孢哨噻 吩滤纸片上，于10分钟内由黄色转变为 红色即阳性结果，示产色头孢菌素的 β－内酰胺环被酶打开。 2 .碘淀粉测定法 用接种环挑取受试菌混于青霉素溶液中， 室温下振摇30分钟。加入淀粉液后，再加 入碘液，溶液变蓝，继续振摇。若检测菌 产生酶，则可水解青霉素β－内酰胺环变 为青霉素噻唑酸，后者与碘结合，使碘淀 粉复合物转变为无色，10分钟之内蓝色消 失者为产酶株。 四、特殊耐药菌检测 （一）耐甲氧西林葡萄球菌检测 1．定义 对1μg苯唑西林纸片的抑菌圈直径＜ 10mm，或其MIC＞4μg／ml的金黄色葡萄球菌； 对1μg苯唑西林抑菌圈直径＜17mm，或MIC ＞ 0．5μg／ml的凝固酶阴性葡萄球菌；