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第2讲　微生物的培养和利用 2015备考·最新考纲 1．微生物的分离和培养　2.某种微生物数量的测定　3.培养基对微生物的选择作用 考点1　微生物的实验室培养(5年15考)　 (2013新课标全国Ⅱ卷、四川理综、江苏卷，2012北京卷、浙江、山东，2011天津) 一、培养基 1．概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出的供其 的营养基质 3．培养基的种类及用途 特别提醒 自养微生物与异养微生物所需的营养物质不同： ①自养微生物所需的碳源、氮源来自含碳、含氮的无机物，而异养微生物需要的碳源、氮源来自含碳、含氮的有机物，因此可根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。②含氮无机物不但能给自养微生物提供氮源，也能作为能源物质，提供能量，如NH3既作为硝化细菌的氮源也作为能源。 3．消毒和灭菌比较 三、微生物的纯化培养及菌种的保藏 3．纯化大肠杆菌的方法 常用的微生物接种方法有 和 。 (1)平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。(如下图示) (2)稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的 ，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。( 如下图所示) ①系列稀释操作(如下图所示) ②涂布平板操作(如下图所示) (3)两种纯化细菌的方法的比较 特别提醒 (1)配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的注意事项 ①倒平板的适宜温度是50 ℃左右，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。 ②平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 (2)平板划线操作的注意事项 ①第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环。 ②灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。 ③划线时最后一区不要与第一区相连。 ④划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。 　 微生物培养与分离的考查 1．(2013·江苏)某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是 (　　)。 A．培养基分装到培养皿后进行灭菌 B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线 C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养 D．培养过程中每隔一周观察一次 解析　培养微生物的过程中应先灭菌再倒平板，A错误；每一次划线前都要进行接种环的灼烧灭菌，B正确；接种后的培养皿应在恒温培养箱中进行培养，光照会影响温度等条件；培养过程中观察间隔的时间一般不超过24 h。 答案　B 　 微生物实验室培养的拓展应用 2．(2013·新课标全国Ⅱ理综)临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。 回答下列问题： (1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用____________法或____________法将样本接种于固体培养基表面，经过 选择培养、鉴别等步骤获得。 (2)取该单菌落适当稀释，用__________法接种于固体培养基表面，在37 ℃培养箱中培养24 h，使其均匀生长，布满平板。 (3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A____________；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B____________；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明 __________________； 含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的____________。 (4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好选用抗生素__________。 解析　(1)在微生物的培养过程中，常用来分离微生物的方法是稀释涂布平板法或平板划线法。(2)为了使微生物在培养基上能够均匀分布，一般用稀释涂布平板法将微生物接种在培养基上。(3)在抗药性检验过程中，如果在菌落周围出现透明圈，说明此种抗生素可抑制该细菌；透明圈的大小表示此种抗生素抗菌效果的强弱。据此可判断抗菌效果强弱依次是A、C、B；D的透明圈中出现了一个菌落，说明该菌落对此种抗生素具有耐药性。 答案　(1)平板划线　稀释涂布(或涂布)平板　(2)稀释涂布平板(涂布)　(3)敏感　不敏感　该致病菌对C的敏感性比对A的弱　耐药菌　(4)A 归纳比较 1